Amplite 比色法尿素定量试剂盒 蓝色

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产品优势

1.最低检测限达10 µM（150 µL检测体系）

2.兼容96孔板或384孔板格式

3.无需分离步骤即可实现自动化操作需分离步骤即可实现自动化操作

 

适用范围

用于尿素检测

 

产品介绍

尿素是动物体内蛋白质和氨基酸代谢的终末降解产物，由肝脏合成、肾脏分泌并通过尿液排出。临床实验室中，尿素检测是评估健康状况的重要指标。血液尿素氮（BUN）检测通过测定血液中以尿素形式存在的氮含量，通常与肌酐检测联合应用，用于评估肾功能及辅助诊断肾脏疾病。

Amplite®比色法尿素检测试剂盒提供了一种简便、灵敏的检测方法，可定量血清、血浆和尿液等生物样本中的尿素浓度。该检测基于尿素在检测缓冲液中的酶偶联反应，最终生成蓝色产物，其颜色深度与样本中尿素浓度成正比，可在660-670 nm波长下进行比色测定。

Amplite® 比色法尿素测定试剂盒提供简便的检测方法，可在 150 µL 检测体积中检测低至 10 µM 的尿素。该测定可在便捷的 96 孔或 384 孔微量孔板中进行，并且易于自动化操作，无需分离步骤。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	665nm
推荐孔板:	透明底板

标准操作流程

实验概览

1.配制尿素标准品/测试样本（50 µL/孔）

2.加入尿素工作液（50 µL/孔）

3.室温或37°C孵育30-60分钟

4.加入检测缓冲液II

5.测定665 nm处吸光度

 

储备液配制

所有未使用完的储备液应分装为单次使用量，-20°C保存， 避免反复冻融

检测酶混合液（100×）：

向检测酶混合液（组分A）中加入100 µL超纯水（ddH₂O），配制100×储备液

 

 尿素标准品梯度稀释 

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/10058

1.取1 μL 1.0 M尿素标准品（组分D）加入999 µL DPBS，配制1.0 mM US7标准液

2.将US7标准液按1:3梯度稀释，制备US6-US1系列标准液

 

工作液配制

向5 mL检测缓冲液I（组分B）中加入50 μL 100×检测酶混合液储备液，混匀即得尿素工作液

注意：1.工作液需现配现用，避光保存

          2.随储存时间延长检测灵敏度会降低

          3.建议使用新鲜配制的工作液以获得好的结果

样品分析

表1.透明底部96孔微孔板中尿素标准品和测试样品的布局。 US =尿素标准（US1-US7,1至1000μM），BL =空白对照，TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
US1	US1	...	...
US2	US2	...	...
US3	US3
US4	US4
US5	US5
US6	US6
US7	US7

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
US1-US7	50ul	连续稀释液（1至1000μM）
BL	50ul	DPBS
TS	50ul	测试样本

1.根据表1和2中提供的布局制备尿素标准品（US），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向尿素标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL尿素工作溶液，使总尿素测定体积为100μL/孔。384孔板，每孔中加入25μL尿素工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温或37°C下避光孵育反应30-60分钟。

4.向每个孔中加入50μL测定缓冲液II（组分C），使得总测定体积为150μL/孔。对于384孔板，向每孔中加入25μL测定缓冲液II（组分C），总测定体积为75μL/孔。

5.在室温下孵育10-15分钟，并使用吸光度酶标仪监测660-670nm处的吸光度增加。

注意：添加分析缓冲液II（组分C）后颜色变为黄色，孵育后尿素标准品或样品孔将显示蓝绿色。颜色的强度将在15-30分钟内达到大值，并且与尿素的浓度成比例。

          最后颜色在室温下稳定约1小时，颜色强度会随时间降低。