Amplite 比色法黄嘌呤检测试剂盒

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产品优势

100 µL反应体系中可检测低至1.2 µM的黄嘌呤浓度

适用范围

用于黄嘌呤检测

产品介绍

黄嘌呤是一种广泛存在于人体组织及体液中的嘌呤碱基。多种强效兴奋剂（包括咖啡因、氨茶碱、IBMX、副黄嘌呤、己酮可可碱、可可碱和茶碱等）均衍生自黄嘌呤，这些物质在较高浓度时可引发心率增快、心肌收缩力增强乃至心律失常等药理效应。因此，检测生物样本中黄嘌呤水平的变化对疾病诊断和治疗监测具有重要意义。

Amplite®比色法黄嘌呤检测试剂盒提供了一种快速、超灵敏的黄嘌呤定量检测方案。该检测可在96孔板或384孔板中便捷完成，其原理是通过黄嘌呤氧化酶将黄嘌呤氧化为尿酸并释放过氧化氢，随后利用Amplite® Red显色体系，在576 nm波长处通过酶标仪进行特异性检测。实验数据显示，该试剂盒在100 µL反应体系中可检测低至1.2 µM的黄嘌呤浓度。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备黄嘌呤标准品和测试样品（50 µL）
2.添加黄嘌呤工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.OD比为570/610 nm时读取吸光度增加

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。避免反复冻融。
1.1 Amplite 红色底物储备液（250X）：
在Amplite 红色底物（组分A）的小瓶中加入40 µL DMSO（组分F）。注意：Amplite 红色底物在硫醇（如二硫苏糖醇（DTT）和2-巯基乙醇）的存在下不稳定。反应中DTT或2-巯基乙醇的终浓度应不高于10 µM。由于Amplite Red的pH不稳定> 8.5，因此应在pH 7 – 8（建议pH 7.4）下进行测定。

1.2 HRP储备溶液（500X）：
将100 µL测定缓冲液（组分B）加到辣根过氧化物酶（组分C）小瓶中。

1.3 黄嘌呤氧化酶（XO）储备溶液（100X）：
向小瓶黄嘌呤氧化酶标准品（组分E）中添加100 µL测定缓冲液（组分B），制成黄嘌呤氧化酶（XO）储备液（100X）。

1.4 黄嘌呤标准溶液（100 µM）：
将5 µL黄嘌呤标准品（组分D）添加到995 µL测定缓冲液（组分B）中，得到100 µM黄嘌呤标准溶液。

2.标准溶液配制

黄嘌呤标准品
用100 µM黄嘌呤标准溶液（X7）进行1：3系列稀释，以获得黄嘌呤标准液（X6-X1）。

3.工作溶液配制

将20μL的Amplite Red底物储备液（250X），10μL的HRP储备液（500X）和50μL的黄嘌呤氧化酶储备液（100X）加入5 mL的测定缓冲液中，使总体积为5.08 mL，避光。

样品操作及实验分析

表1.在透明的底部96孔微孔板（50 µL /孔）中的黄嘌呤标准品和测试样品的布局。 X =黄嘌呤标准品（X1-X7，0.1至100 µM），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备黄嘌呤标准品（X），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向黄嘌呤标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL工作溶液，以使黄嘌呤测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应30至60分钟。

4.使用吸光度板读数器以570/610 nm的OD比监视信号强度。