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Amplite 荧光法L-抗坏血酸检测试剂盒

英文名称:Amplite® Fluorimetric Ascorbic Acid Assay Kit
产品参数
Ex (nm)-Em (nm)-
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

Amplite 荧光法L-抗坏血酸检测试剂盒是美国AAT Bioquest生产的用于检测抗坏血酸的试剂盒,L-抗坏血酸(也称为维生素C)是细胞分裂,生长和防御中植物和动物的关键代谢物。抗坏血酸由大多数哺乳动物物种的肝脏中的葡萄糖产生。对于人类而言,抗坏血酸必须从食物中获得才能存活,而缺乏足够的维生素C会导致坏血病,终可能导致死亡。抗氧化剂抗氧化剂可以降低患癌症和心血管疾病等慢性疾病的风险。在食品工业中,抗坏血酸及其钠,钾和钙盐通常用作抗氧化食品添加剂。 AAT Bioquest的Amplite 荧光抗坏血酸检测试剂盒提供灵敏的荧光检测,用于定量生物样品中的总抗坏血酸和脱氢抗坏血酸(DHA)与抗坏血酸的比例。它利用将抗坏血酸氧化成DHA的酶反应,可以通过荧光酶标仪用Ascorbrite Blue检测。该测定可以检测样品中1uM的总抗坏血酸。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商,为您提供优质的Amplite 荧光法L-抗坏血酸检测试剂盒。 

 

适用仪器


荧光酶标仪  
Ex: 340nm
Em: 430nm
Cutoff: 420nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.用稀释的抗坏血酸标准品(50μL)制备测试样品
2.加入等体积的工作溶液(50μL)
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 340 / 430nm处的荧光强度

 

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1Ascorbrite Blue原液(200X):
将50μLDMSO(组分E)加入Ascorbrite Blue(组分A)中以制备200X Ascorbrite Blue原液。

1.2抗坏血酸标准溶液(100 mM):
将200μLddH2O加入抗坏血酸标准小瓶(组分D)中以制备100mM抗坏血酸标准溶液。

 

2.标准溶液配制

2.1抗坏血酸标准溶液
将10μL100mM抗坏血酸加入990μL测定缓冲液中,得到1000μM抗坏血酸溶液(AA7)。 然后取1000μM抗坏血酸标准溶液,进行1:3连续稀释,得到连续稀释的抗坏血酸标准品(AA1 - AA6)。 注意:抗坏血酸水溶液不稳定,会氧化成DHA。

 

3.工作溶液配制

3.1总AA测定
将5mL测定缓冲液(组分C)加入一瓶酶混合物(组分B)中。 然后将25uL Ascorbrite Blue原液(200X)加入同一瓶中。 好好混合。

3.2DHA测定
在合适的容器中,加入5mL含有25uL AscorbriteTM Blue原液(200X)的测定缓冲液(组分C)。 好好混合。 注意:或者,可以通过在一个酶混合瓶(组分B)中加入100μLddH2O制备酶原液,制备50X酶原液,并按比例用于总AA测定(例如,1mL总AA测定工作溶液) ,将20μL50X酶原液和5μL200XAscorbrite Blue原液添加到1 mL分析缓冲液中。 注意:溶液及时使用,避免直接暴露在光线下。

 

操作步骤

表1.固体黑色96孔微孔板中抗坏血酸标准品和测试样品的布局。

AA =抗坏血酸标准品(AA1-AA7,1至1000μM); BL =空白对照; TS =测试样品。

BL BL TS TS
AA1 AA1 ... ...
AA2 AA2 ... ...
AA3 AA3    
AA4 AA4    
AA5 AA5    
AA6 AA6    
AA7 AA7    

 

表2.每个孔的试剂组成

容积 试剂
AA1-AA7 50ul 连续稀释(1至1000μM)
BL 50ul 分析缓冲液(组分C)
TS 50ul 测试样品

1.根据表1和2的布局制备抗坏血酸标准品(AA),空白对照(BL)和测试样品(TS)。对于384孔板,每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.在抗坏血酸标准品,空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液,使总抗坏血酸测定体积为100μL/孔。 对于384孔板,在每个孔中加入25μL工作溶液,总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.用Ex / Em = 340 / 430nm的荧光板读数器监测荧光增加(截止:420nm)。

 

数据分析

        从空白标准孔获得的读数(RFU)用作阴性对照。 从其他标准的读数中减去该值,以获得基线校正值。 然后,绘制标准读数以获得标准曲线和方程。 该等式可用于计算抗坏血酸样品。 点击使用在线线性回归计算器

图1.使用Gemini酶标仪(Molecular Devices),在固体黑色96孔板上用Amplite 荧光抗坏血酸测定试剂盒测量抗坏血酸剂量反应。

 

参考文献

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The glycoglycerolipid 1,2-dipalmitoyl-3-(N-palmitoyl-6'-amino-6'-deoxy-alpha-d-glucosyl)-sn-glycerol is no inhibitor of the human Myt1 kinase
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产品名称 货号
Amplite 荧光法谷氨酸检测试剂盒 红色荧光 Cat#10054