Amplite 荧光法L-抗坏血酸检测试剂盒

产品货期

咨询

产品优势

1.灵敏度高

2.可检测低至1 μM的总抗坏血酸浓度

适用范围

用于抗坏血酸检测

产品介绍

L-抗坏血酸（维生素C）是动植物细胞分裂、生长和防御机制中的关键代谢物。大多数哺乳动物可在肝脏中由葡萄糖合成抗坏血酸，但人类必须通过食物摄取，长期缺乏会导致坏血病，甚至危及生命。作为抗氧化剂，抗坏血酸能降低癌症和心血管疾病等慢性病风险。在食品工业中，抗坏血酸及其钠、钾、钙盐常作为抗氧化添加剂，用于保持食品色泽和风味。

AAT Bioquest品牌的Amplite®荧光法抗坏血酸检测试剂盒提供了一种高灵敏度检测方案，可定量生物样本中的总抗坏血酸及脱氢抗坏血酸（DHA）与抗坏血酸的比值。其检测原理基于酶促氧化反应：抗坏血酸被氧化为DHA后，通过Ascorbrite™ Blue荧光探针结合荧光酶标仪进行检测，可检测低至1 μM的总抗坏血酸浓度。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.用稀释的抗坏血酸标准品（50μL）制备测试样品
2.加入等体积的工作溶液（50μL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 340 / 430nm处的荧光强度

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融循环。
1.1Ascorbrite Blue原液（200X）：
将50μLDMSO（组分E）加入Ascorbrite Blue（组分A）中以制备200X Ascorbrite Blue原液。

1.2抗坏血酸标准溶液（100 mM）：
将200μLddH₂O加入抗坏血酸标准小瓶（组分D）中以制备100mM抗坏血酸标准溶液。

2.标准溶液配制

2.1抗坏血酸标准溶液
将10μL100mM抗坏血酸加入990μL测定缓冲液中，得到1000μM抗坏血酸溶液（AA7）。 然后取1000μM抗坏血酸标准溶液，进行1：3连续稀释，得到连续稀释的抗坏血酸标准品（AA1 - AA6）。 注意：抗坏血酸水溶液不稳定，会氧化成DHA。

3.工作溶液配制

3.1总AA测定
将5mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合物（组分B）中。 然后将25uL Ascorbrite Blue原液（200X）加入同一瓶中。 好好混合。

3.2DHA测定
在合适的容器中，加入5mL含有25uL AscorbriteTM Blue原液（200X）的测定缓冲液（组分C）。 好好混合。 注意：或者，可以通过在一个酶混合瓶（组分B）中加入100μLddH2O制备酶原液，制备50X酶原液，并按比例用于总AA测定（例如，1mL总AA测定工作溶液） ，将20μL50X酶原液和5μL200XAscorbrite Blue原液添加到1 mL分析缓冲液中。 注意：溶液及时使用，避免直接暴露在光线下。

操作步骤

表1.固体黑色96孔微孔板中抗坏血酸标准品和测试样品的布局。

AA =抗坏血酸标准品（AA1-AA7,1至1000μM）; BL =空白对照; TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2的布局制备抗坏血酸标准品（AA），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.在抗坏血酸标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL工作溶液，使总抗坏血酸测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30分钟至1小时。

4.用Ex / Em = 340 / 430nm的荧光板读数器监测荧光增加（截止：420nm）。