Amplite 荧光法辅酶A定量试剂盒 绿色荧光

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产品优势  

1.在100 µL检测体系中可检测低至4皮摩尔的CoA（相当于40 nM浓度）

2.兼容96孔或384孔微孔板检测模式

 

适用范围

用于辅酶A（CoA）检测

 

产品介绍

辅酶A（CoA）是一种普遍存在于所有细胞生命形式中的必需辅因子，作为多种生物合成、能量生成及分解代谢途径中的主要酰基载体。它在脂肪酸的合成与氧化、丙酮酸氧化以及三羧酸循环等过程中发挥关键作用。对CoA含量的检测是研究众多生物体系中生理过程与事件的重要任务之一。目前市场上虽有少量试剂或检测试剂盒可用于生物体系中CoA的定量分析，但现有商用试剂盒要么灵敏度不足，要么操作流程繁琐。

Amplite®荧光法辅酶A定量检测试剂盒提供了一种超灵敏的荧光检测方法，通过检测CoA中的-SH基团实现精准定量。该试剂盒采用我们专利的荧光CoA Green™染料，该染料与-SH基团反应后会发出强荧光信号。本试剂盒在100 µL检测体系中可检测低至4皮摩尔的CoA（相当于40 nM浓度）。该检测可在96孔或384孔微孔板中便捷完成，无需分离步骤，并能轻松适配自动化操作系统。

96孔板检测示例

概述

准备CoA测定混合物（50μL）

添加CoA标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育10分钟 -  1小时

监测Ex / Em = 490/520 nm处的荧光增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分

 

操作步骤

1.准备CoA标准库存解决方案：

将200μlddH2O加入CoA标准小瓶（组分C）中以制备1mM（1nmol / L）储备溶液。

注意1：强烈建议使用已用氮气喷射的ddH2O去除氧气，以制备辅酶A原液。

注意2：水溶液不稳定，会迅速降解。 应储存在2-8℃，并在1天内使用。

 

2.准备100X CoA Green 原液：

将100μLDMSO（组分D）加入到小瓶CoA Green （组分A）中以制备100X储备溶液。

注意：未使用的CoA Green 原液应分成一次性使用的等分试样，保存在-20℃并避光。

 

3.准备CoA Assay混合物：

将50L 100X CoA Green 储备溶液（来自步骤2）加入5mL测定缓冲液（组分B）中，并充分混合。

 

4.准备CoA标准品的连续稀释液（0至30μM）：

4.1将30μLCoA标准储备溶液（来自步骤1）加入970L测定缓冲液（组分B）中以产生30μM（30pmol / L）CoA标准品。

注意：稀释的CoA标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

4.2取200μL30μMCoA标准溶液，用Assay缓冲液（组分B）进行1：3连续稀释，得到10,3,1,0.3,0.1,0.03,0.01和0μM连续稀释的CoA标准品。

4.3将CoA标准品和含CoA的测试样品加入到实心黑色96孔微孔板中，如说明书中的表1和2所示。

注意：根据需要处理细胞或组织样本。

 

5.运行CoA测定：

5.1将50μLCoA反应混合物（来自步骤3.1）添加至CoA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤4.3），以使总CoA测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLCoA反应混合物。

5.2在室温下孵育反应10分钟至1小时，避光。

5.3用荧光板读数器监测Ex / Em = 490 / 520nm处的荧光增加。