Amplite 荧光法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）检测试剂盒

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产品优势

在100 µL反应体积中检测到低至1 mU/ml的G6PD。

适用范围

用于葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）检测

产品介绍

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）催化葡萄糖-6-磷酸转化为6-磷酸葡萄糖酸-δ-内酯，这是磷酸戊糖途径的第一个限速步骤。该代谢途径通过维持辅酶烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（NADPH）的水平，为红细胞等细胞提供还原能量，并参与戊糖的生成。NADPH的产生对肝脏、乳腺、脂肪组织和肾上腺等积极参与脂肪酸和/或类异戊二烯生物合成的组织至关重要。NADPH还能维持这些细胞中谷胱甘肽的水平，帮助保护红细胞免受氧化损伤。G6PD缺乏会使个体易患非免疫性溶血性贫血。

AAT Bioquest品牌的Amplite®荧光法葡萄糖-6-磷酸脱氢酶检测试剂盒提供了一种简单、灵敏且快速的荧光检测方法，用于检测血清、血浆、尿液以及细胞培养样本等生物样品中的G6PD。在酶偶联检测中，G6PD活性与NADPH浓度成正比，NADPH通过荧光NADPH传感器特异性监测，生成强红色荧光产物。荧光信号可通过荧光酶标仪读取。使用该G6PD检测试剂盒，我们能够在100 µL反应体积中检测到低至1 mU/ml的G6PD。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备G6PD工作溶液（50 µL）
2.添加G6PD标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟-2小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm时的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
1.1 NADP储备溶液（100X）：
在NADP小瓶（组分C）中加入100 µL H2O，制成100X NADP储备溶液。

1.2 G6PD标准溶液（100 U / mL）：
将100 µL H2O或1X PBS缓冲液加到G6PD Standard（组分D）的小瓶中，制成100 U / mL G6PD标准溶液。

2.标准溶液

G6PD标准
将10 µL G6PD标准溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成1000 mU / mL G6PD标准溶液。 将15 µL的1000 mU / mL G6PD标准溶液加入到485 uL的1X PBS缓冲液中以生成30 mU / mL的G6PD（G6PD7），然后进行1：3的系列稀释以获得G6PD标准品的系列稀释（G6PD6- G6PD1）。

注意：稀释的G6PD标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液

将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶探针（组分A）中。 将50 µL NADP储备溶液（100X）加入组分A的瓶子中，并充分混合。

注意：此G6PD分析工作溶液足以用于一个96孔板。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G6PD标准品和测试样品的布局。 G6PD = D-葡萄糖-6-磷酸脱氢酶标准品（G6PD1- G6PD7，0.04至30 mU / mL）; BL =空白对照； TS =测试样品

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，准备G6PD标准品（G6PD），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.向G6PD标准品，空白对照和测试样品的每个孔中添加50 µL G6PD工作溶液，以使总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应30分钟至2小时。

4.用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm处监测荧光增加，在570 nm处截止。