Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒

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产品优势

1."即混即读"模式，兼容高通量筛选平台

2.在100 µL反应体系中可检测低至41皮摩尔的G3P（相当于0.41 µM浓度）

适用范围

用于甘油-3-磷酸检测

产品介绍

甘油-3-磷酸（G3P）是糖酵解代谢途径中的重要中间产物。动物、真菌和植物都利用G3P来生成ATP。在脑细胞和骨骼肌细胞中，G3P被用于再生NAD+。该物质已被证实与肥胖等脂质代谢失衡疾病密切相关。

Amplite 荧光法甘油-3-磷酸检测试剂盒提供了灵敏的G3P定量检测方案——通过Amplite® Red荧光底物进行定量检测，其信号强度与G3P氧化酶偶联反应中产生的过氧化氢浓度成正比。该试剂盒采用"即混即读"的优化设计，兼容高通量筛选平台。在100 µL反应体系中可检测低至41皮摩尔的G3P（相当于0.41 µM浓度）。检测过程无需分离步骤，支持96孔板或384孔板操作模式，使用荧光酶标仪即可轻松读取信号。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备G3P工作溶液（50 µL）
2.添加G3P标准品或测试样品（50 µL）
3.室温孵育10-30分钟
4.在Ex / Em = 540/590 nm时读取荧光强度

溶液配制

1.储存溶液配制

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite Red底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite Red底物（组分A）的小瓶中，制成200X储备液。 避免暴露在光线下。

1.2 3-磷酸甘油（G3P）标准溶液（10 mM）：
将250 µL ddH₂O加到G3P标准品（组分D）的小瓶中，制成10 mM G3P标准品溶液。

2.标准溶液配制

G3P标准
将10 µL的10 mM G3P标准储备溶液添加到990 µL 1X PBS缓冲液中，以生成100 µM的标准溶液（CS7）。 然后执行1：3的系列稀释，以得到系列稀释的G3P标准品（CS6-CS1）。 注意：稀释的G3P标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.工作溶液配制

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）添加到瓶酶混合液（组分B）中，并充分混合。

3.2 将25 µL Amplite Red底物储备液（200X）加入组分B和C的瓶子中，制成G3P工作溶液（组分A，B和C）。注意：请立即使用并远离光线。 注意：可以将组分B和组分C的未使用混合物分成单份使用，并保存在-20°C下。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中G3P标准品和测试样品的布局。 CS = G3P标准（CS1-CS7，0.1至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个单元的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将G3P标准品（CS），空白对照（BL）和测试样品（TS）准备到96孔黑色微孔板中。对于384孔板，请使用25 µL试剂 每孔而不是50 µL。

2.在G3P标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL G3P工作溶液，以使G3P测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.在避光条件下，于室温下孵育反应10至30分钟。

4.使用荧光酶标仪在Ex / Em = 540/590 nm（在570 nm截止）处监测荧光的增加。