Amplite 荧光法丙三醇检测试剂盒

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产品优势

1.灵敏度高

2.在100 μL反应体系中，可检测低至0.015 mg/L（约0.16 μM）的甘油浓度

适用范围

用于甘油检测

产品介绍

甘油作为肝脏和脂肪组织中甘油三酯及磷脂合成的重要前体，在禁食状态下，储存的甘油三酯可被水解生成游离甘油和脂肪酸。释放至血液中的游离甘油含量与甘油三酯/脂肪酸循环速率成正比，这一过程对代谢调节和产热具有重要作用。

Amplite®荧光法甘油（丙三醇）检测试剂盒为生物样本中的甘油检测提供了高灵敏度荧光检测方案。其检测原理基于甘油酶偶联反应，反应生成的过氧化氢（H₂O₂）可通过Amplite® HRP底物在HRP偶联反应中被特异性检测，并利用荧光酶标仪测定荧光信号。该试剂盒在100 μL反应体系中可检测低至0.015 mg/L（约0.16 μM）的甘油浓度。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备甘油工作溶液（50 µL）
2.加入甘油标准品或测试样品（50 µL）
3.在室温下孵育10-30分钟
4.监测Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）的荧光增加

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免重复冻融循环。
1.1 Amplite HRP底物储备液（200X）：
将50 µL DMSO（组分E）添加到Amplite HRP底物（组分A）的小瓶中，制成200X Amplite HRP底物原液,避光。

1.2 甘油标准溶液（1 mg / mL）：
将1 mL ddH₂O或1x PBS缓冲液添加到小瓶甘油标准溶液（组分D）中，制成1 mg / mL甘油标准溶液。

2.标准溶液

甘油标准
将10μL的1 mg / mL甘油标准溶液添加到990μL的1x PBS缓冲液中，以生成10μg/ mL的甘油标准溶液（GS7）。取10 µg / mL甘油标准溶液（GS7），并在1x PBS缓冲液中进行1：3系列稀释，以得到系列稀释的甘油标准液（GS6-GS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合物（组分B）中，并混合均匀。

3.2 将25 µL 200X Amplite HRP底物原液添加到组分B + C的瓶子中，并充分混合以制成甘油工作液。 注意：这种甘油工作溶液足以用于一个96孔板。 它不稳定，请及时使用。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中甘油标准品和测试样品的布局。 GS =甘油标准品（GS1-GS7，0.01至10 µg / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局，准备甘油标准品（GS），空白对照（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25 µL试剂代替50 µL。

2.在甘油标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL甘油工作溶液，以使甘油总测定体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请在每个孔中添加25 µL甘油工作溶液，总体积为50 µL /孔。

3.避光保存，室温下孵育反应10-30分钟。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止= 570 nm）处监视荧光的增加。