Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

可检测低至至10 pg/孔的微量单克隆抗体

 

适用范围

适用于以羊抗兔IgG作为二抗的检测

 

产品介绍

辣根过氧化物酶（HRP）是一种分子量约40 kDa的小分子酶，被广泛应用于多种生物检测领域。HRP偶联物常用作ELISA、免疫组织化学技术以及Northern、Southern和Western blot分析的二抗检测试剂。得益于其小分子特性，HRP几乎不会干扰抗体-抗原复合物的形成。通常以4:1的比例与抗体偶联，且比其他标记酶更具价格优势。但需注意的是，HRP对叠氮化钠等防腐剂的耐受性较差，即使低浓度也会使其失活。

Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒包含所有必需组分，其中包括专有的荧光底物Amplite® Red HRP。该试剂盒提供优化的检测方案，兼容高通量液体处理系统，可检测低至至10 pg/孔的微量单克隆抗体。检测信号既可用荧光酶标仪读取，也可用吸光酶标仪检测，适用于以羊抗兔IgG作为二抗的检测体系。

 

适用仪器

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光吸收酶标仪
吸收:	576 ± 5nm
推荐孔板:	透明底板
荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

简要概述

1.准备ELISA板
2.添加山羊抗兔IgG-HRP共轭工作液（100μL/孔）
3.在室温下孵育30分钟
4.清洗孔（PBS-Tween 3X）
5.加入过氧化物酶工作液（100μL/孔）
6.在室温下孵育30-60分钟
7.监测Ex / Em = 540/490 nm处的荧光强度（截止= 570 nm）

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液（200X）：
将250μLDMSO（组分D）加入到Amplite 红色过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中并充分混合以制备200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。

注意：50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备液足以用于1个平板。 应立即使用原液,避光。

2. H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。

注意：稀释的H₂O₂储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

3.工作溶液

将50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和100μL的20mM H₂O₂储备溶液加入9.85mL的测定缓冲液（组分C）中并充分混合以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

点击查看细胞样品制备指南 

 

样品分析

1.准备ELLISA板：

1.1通过执行所有必要的ELISA制备步骤制备ELISA微量培养板（包括适当的对照）。

1.2将2μL山羊抗兔IgG-HRP缀合物（组分E）加入10mL含1％BSA的PBS（PBS-BSA，不包括在内）中以制备山羊抗兔IgG-HRP缀合物工作溶液。

注意：10 mL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液足以用于1个平板。建议将此山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液的浓度作为初始浓度进行尝试。每个特定应用的佳浓度可能需要凭经验确定。

1.3用含有0.02％至0.05％Tween 20（PBS-Tween）和排液的PBS洗涤ELISA孔三次。

1.4每孔加入100μL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作液。

1.5在室温下孵育30分钟。排出山羊抗兔IgG-HRP结合物。

1.6用PBS-Tween洗涤孔三次并排干。

 

2.在ELISA板中运行过氧化物酶测定：

2.1在含有样品和对照的每个排出的微孔板中加入100μL过氧化物酶工作溶液。

2.2在室温下孵育反应30分钟或更长时间，避光。

2.3用荧光板读数器在激发= 530-570nm，发射= 590-600nm（佳Ex / Em = 540 / 590nm，截止= 570nm）监测荧光增加。

注意：也可以用吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读板。与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。