Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒 红色荧光
Ex (nm) | 571 | Em (nm) | 584 |
分子量 | - | 溶剂 | - |
存储条件 | - |
产品货期
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产品优势
可检测低至至10 pg/孔的微量单克隆抗体
适用范围
适用于以羊抗兔IgG作为二抗的检测
产品介绍
辣根过氧化物酶(HRP)是一种分子量约40 kDa的小分子酶,被广泛应用于多种生物检测领域。HRP偶联物常用作ELISA、免疫组织化学技术以及Northern、Southern和Western blot分析的二抗检测试剂。得益于其小分子特性,HRP几乎不会干扰抗体-抗原复合物的形成。通常以4:1的比例与抗体偶联,且比其他标记酶更具价格优势。但需注意的是,HRP对叠氮化钠等防腐剂的耐受性较差,即使低浓度也会使其失活。
Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒包含所有必需组分,其中包括专有的荧光底物Amplite® Red HRP。该试剂盒提供优化的检测方案,兼容高通量液体处理系统,可检测低至至10 pg/孔的微量单克隆抗体。检测信号既可用荧光酶标仪读取,也可用吸光酶标仪检测,适用于以羊抗兔IgG作为二抗的检测体系。
适用仪器
光吸收酶标仪 | |
吸收: | 576 ± 5nm |
推荐孔板: | 透明底板 |
荧光酶标仪 | |
Ex: | 540nm |
Em: | 590nm |
Cutoff: | 570nm |
推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
样品实验方案
简要概述
1.准备ELISA板
2.添加山羊抗兔IgG-HRP共轭工作液(100μL/孔)
3.在室温下孵育30分钟
4.清洗孔(PBS-Tween 3X)
5.加入过氧化物酶工作液(100μL/孔)
6.在室温下孵育30-60分钟
7.监测Ex / Em = 540/490 nm处的荧光强度(截止= 570 nm)
溶液制备
1.储备溶液
所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液(200X):
将250μLDMSO(组分D)加入到Amplite 红色过氧化物酶底物(组分A)的小瓶中并充分混合以制备200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。
注意:50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备液足以用于1个平板。 应立即使用原液,避光。
2. H2O2储备溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2储备溶液。
注意:稀释的H2O2储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。
3.工作溶液
将50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和100μL的20mM H2O2储备溶液加入9.85mL的测定缓冲液(组分C)中并充分混合以制备过氧化物酶工作溶液,避光。
样品分析
1.准备ELLISA板:
1.1通过执行所有必要的ELISA制备步骤制备ELISA微量培养板(包括适当的对照)。
1.2将2μL山羊抗兔IgG-HRP缀合物(组分E)加入10mL含1%BSA的PBS(PBS-BSA,不包括在内)中以制备山羊抗兔IgG-HRP缀合物工作溶液。
注意:10 mL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液足以用于1个平板。建议将此山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液的浓度作为初始浓度进行尝试。每个特定应用的佳浓度可能需要凭经验确定。
1.3用含有0.02%至0.05%Tween 20(PBS-Tween)和排液的PBS洗涤ELISA孔三次。
1.4每孔加入100μL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作液。
1.5在室温下孵育30分钟。排出山羊抗兔IgG-HRP结合物。
1.6用PBS-Tween洗涤孔三次并排干。
2.在ELISA板中运行过氧化物酶测定:
2.1在含有样品和对照的每个排出的微孔板中加入100μL过氧化物酶工作溶液。
2.2在室温下孵育反应30分钟或更长时间,避光。
2.3用荧光板读数器在激发= 530-570nm,发射= 590-600nm(佳Ex / Em = 540 / 590nm,截止= 570nm)监测荧光增加。
注意:也可以用吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读板。与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。