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Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒 红色荧光

英文名称:Amplite® Fluorimetric Goat Anti-Rabbit IgG-HRP Conjugate ELISA Assay Kit *Red Fluorescence*
产品参数
Ex (nm)571Em (nm)584
分子量-溶剂-
存储条件-
产品概述

产品货期

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产品优势

可检测低至至10 pg/孔的微量单克隆抗体

 

适用范围

适用于以羊抗兔IgG作为二抗的检测

 

产品介绍

辣根过氧化物酶(HRP)是一种分子量约40 kDa的小分子酶,被广泛应用于多种生物检测领域。HRP偶联物常用作ELISA、免疫组织化学技术以及Northern、Southern和Western blot分析的二抗检测试剂。得益于其小分子特性,HRP几乎不会干扰抗体-抗原复合物的形成。通常以4:1的比例与抗体偶联,且比其他标记酶更具价格优势。但需注意的是,HRP对叠氮化钠等防腐剂的耐受性较差,即使低浓度也会使其失活。

Amplite 荧光法羊抗兔IgG-HRP偶联物ELISA检测试剂盒包含所有必需组分,其中包括专有的荧光底物Amplite® Red HRP。该试剂盒提供优化的检测方案,兼容高通量液体处理系统,可检测低至至10 pg/孔的微量单克隆抗体。检测信号既可用荧光酶标仪读取,也可用吸光酶标仪检测,适用于以羊抗兔IgG作为二抗的检测体系。

 

适用仪器


光吸收酶标仪  
吸收: 576 ± 5nm
推荐孔板: 透明底板
   
荧光酶标仪  
Ex: 540nm
Em: 590nm
Cutoff: 570nm
推荐孔板: 纯黑色孔板
实验方案

样品实验方案

简要概述

1.准备ELISA板
2.添加山羊抗兔IgG-HRP共轭工作液(100μL/孔)
3.在室温下孵育30分钟
4.清洗孔(PBS-Tween 3X)
5.加入过氧化物酶工作液(100μL/孔)
6.在室温下孵育30-60分钟
7.监测Ex / Em = 540/490 nm处的荧光强度(截止= 570 nm)

 

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样,并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1. Amplite 红色过氧化物酶底物储备液(200X):
将250μLDMSO(组分D)加入到Amplite 红色过氧化物酶底物(组分A)的小瓶中并充分混合以制备200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液。

注意:50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备液足以用于1个平板。 应立即使用原液,避光。

2. H2O2储备溶液(20 mM):
将22.7μL的3%H2O2(0.88M,组分B)加入977μL的测定缓冲液(组分C)中以制备20mM H2O2储备溶液。

注意:稀释的H2O2储备溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

 

3.工作溶液

将50μL的200X Amplite 红色过氧化物酶底物储备溶液和100μL的20mM H2O2储备溶液加入9.85mL的测定缓冲液(组分C)中并充分混合以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

点击查看细胞样品制备指南 

 

样品分析

1.准备ELLISA板:

1.1通过执行所有必要的ELISA制备步骤制备ELISA微量培养板(包括适当的对照)。

1.2将2μL山羊抗兔IgG-HRP缀合物(组分E)加入10mL含1%BSA的PBS(PBS-BSA,不包括在内)中以制备山羊抗兔IgG-HRP缀合物工作溶液。

注意:10 mL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液足以用于1个平板。建议将此山羊抗兔IgG-HRP结合物工作溶液的浓度作为初始浓度进行尝试。每个特定应用的佳浓度可能需要凭经验确定。

1.3用含有0.02%至0.05%Tween 20(PBS-Tween)和排液的PBS洗涤ELISA孔三次。

1.4每孔加入100μL山羊抗兔IgG-HRP结合物工作液。

1.5在室温下孵育30分钟。排出山羊抗兔IgG-HRP结合物。

1.6用PBS-Tween洗涤孔三次并排干。

 

2.在ELISA板中运行过氧化物酶测定:

2.1在含有样品和对照的每个排出的微孔板中加入100μL过氧化物酶工作溶液。

2.2在室温下孵育反应30分钟或更长时间,避光。

2.3用荧光板读数器在激发= 530-570nm,发射= 590-600nm(佳Ex / Em = 540 / 590nm,截止= 570nm)监测荧光增加。

注意:也可以用吸光度酶标仪在576±5 nm的波长下读板。与荧光读数相比,吸收检测具有较低的灵敏度。