Amplite 荧光法L-乳酸检测试剂盒

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产品优势

在100μL反应体系中检测灵敏度可达1.4μM

 

适用范围

用于血清、血浆、尿液及细胞培养样本等多种生物样本的检测

 

产品介绍

乳酸作为手性分子存在两种光学异构体：L-乳酸与D-乳酸。在代谢和运动过程中，丙酮酸通过乳酸脱氢酶（LDH）的催化作用持续转化为乳酸。监测乳酸水平能有效评估组织氧供需平衡状态，对细胞及动物生理研究具有重要价值。值得注意的是，哺乳动物无法代谢D-乳酸，其主要通过肾脏途径排泄。

D-乳酸与L-乳酸广泛存在于酸奶、奶酪等发酵乳制品，以及泡菜、腌肉、熏鱼等食品中。这些由细菌代谢产生的乳酸异构体可作为鸡蛋、牛奶、果汁、葡萄酒等食品的重要品质指标。临床研究表明，血液中D-乳酸浓度异常升高通常提示胃肠道菌群过度繁殖。

AAT Bioquest品牌的Amplite®乳酸检测试剂盒（L-乳酸检测货号13814和13815，D-乳酸检测货号13810和13811）提供荧光与吸光度双检测系统，适用于血清、血浆、尿液及细胞培养样本等多种生物样本的检测。该酶偶联反应体系中，乳酸浓度与NADH生成量呈正相关，通过特异性荧光NADH传感器进行检测，检测信号可直接通过荧光酶标仪读取。经验证，该荧光法Amplite® L-乳酸检测试剂盒在100μL反应体系中检测灵敏度可达1.4μM。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

96孔板测定示例

概述

制备D-乳酸测定混合物（50μL）

加入D-乳酸标准品或测试样品（50μL）

在室温下孵育30分钟~2小时

监测吸光度比率在A575nm / A605nm处增加

注意：在开始实验之前，在室温下解冻每个试剂盒组分的一个小瓶。

 

操作方法

1.准备NAD储备溶液（100X）：

向NAD小瓶（组分C）中加入100μLH2O，制成100X NAD储备溶液。

 

2.准备D-乳酸储备液：

将200μLH2 O或1×PBS缓冲液加入到D-乳酸盐标准品（组分D）的小瓶中以制备100mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：未使用的D-lacate标准储备溶液应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

3.准备D-乳酸标准品（0至1 mM）的连续稀释液：

3.1将10μLD-乳酸储备溶液（来自步骤2）加入990L 1x PBS缓冲液中以产生1mM D-乳酸盐标准溶液。

注意：稀释的D-乳酸标准溶液不稳定，应在4小时内使用。

3.2取200μL的1mM D-乳酸标准溶液进行1：3连续稀释，得到300,100,30,10,3,1和0μM的D-乳酸标准品系列稀释液。

3.3如说明书中的表1和2中所述，将含有D-乳酸盐标准品和含D-乳酸盐的测试样品的系列稀释液加入白色透明底96孔微量培养板中。

 

4.准备D-乳酸测定混合物：

4.1将5 mL测定缓冲液（组分B）加入一瓶酶混合物（组分A）中。

4.2将50μLNAD储备液（100X，来自步骤1）加入组分A（来自步骤4.1）的瓶中，并且混合均匀。

注意：这种D-乳酸测定混合物足以用于一个96孔板。 未使用的D-乳酸测定混合物应分成单次使用的等分试样并储存在-20℃。

 

5.运行D-乳酸测定：

5.1将50μLD-乳酸测定混合物（来自步骤4.2）添加到D-乳酸标准品，空白对照和测试样品（参见步骤3.3）的每个孔中，以使总D-乳酸测定体积为100μL/孔。

注意：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLD-乳酸测定混合物。

5.2在室温下孵育反应30分钟至2小时，避光。

5.3用A575nm / A605nm的吸光度读板仪检测吸光度比率的增加。