Amplite 荧光法髓过氧化物酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势  

1.操作便捷：支持96孔或384孔微孔板检测模式，无需分离步骤即可轻松实现自动化操作；

2.双信号检测：采用Amplite® Red底物，既可通过荧光酶标仪（激发/发射波长：571/585 nm）也可通过吸光度酶标仪进行检测；

3.超高灵敏度：在100 µL反应体系中可检测低至0.1 mU/ml的MPO活性；

4.高通量适配：特别适合用于MPO抑制剂的高通量筛选研究。

 

适用范围

用于检测 MPO活性。

 

产品介绍

髓过氧化物酶(MPO)是一种主要存在于中性粒细胞和单核细胞中的绿色血红素蛋白，具有过氧化物酶活性。它能催化过氧化氢与卤素离子反应，生成具有细胞毒性的酸类及其他中间产物，在机体氧依赖性杀伤肿瘤细胞和微生物过程中起重要作用。MPO缺乏症是一种遗传性酶缺陷疾病，可导致免疫功能低下。目前，治疗性MPO抑制剂的研发备受关注。

Amplite®髓过氧化物酶检测试剂盒提供了一种快速、灵敏的MPO检测方案，适用于溶液和细胞裂解液样本。该试剂盒支持96孔或384孔微孔板检测，无需分离步骤即可实现自动化操作；采用Amplite® Red底物，可通过荧光酶标仪(Ex/Em=571/585 nm)或吸光度酶标仪进行双模式检测。在100μL反应体系中，最低可检测0.1 mU/ml的MPO活性，非常适合用于MPO抑制剂的高通量筛选。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

样品实验方案

操作流程

1.加入50 µL MPO标准品或测试样本

2.加入50 µL MPO工作液

3.室温孵育30-60分钟

4.在Ex/Em = 540/590 nm（截止波长570 nm）下读取荧光强度

 

储备溶液制备

所有未使用的储备液应分装后于-20°C保存，避免反复冻融。

1. Amplite red储备液（250X）：

向Amplite™ Red底物（组分A）瓶中加入40 µL DMSO（组分E）,需现配现用

注意事项：

该底物遇硫醇类物质（如DTT、β-巯基乙醇）不稳定，反应体系中终浓度需≤10 µM

高pH（>8.5）条件下不稳定，建议在pH 7-8范围内使用（推荐使用pH 7.4的配套检测缓冲液）

2. H2O2储备溶液（500X，10 mM）：

取10 µL 3% H₂O₂（0.88M，组分C）加入870 µL检测缓冲液（组分B）

注意事项：稀释后的H₂O₂溶液不稳定，剩余部分应弃用

3.髓过氧化物酶（MPO）标准溶液（200 mU / mL）：

向MPO标准品（组分D）瓶中加入50 µL检测缓冲液（组分B）

注意事项：每瓶约含5-10 mU MPO

 

标准品溶液配置

MPO标准曲线制备：

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11301

1.取20 µL 200 mU/mL MPO标准溶液加入380 µL检测缓冲液，制得10 mU/mL标准液（MPO7）

2.对10 mU/mL标准液进行1:3梯度稀释，获得MPO6-MPO1系列标准品

工作液配

MPO工作液配制（总体积5.03 mL）：

取5 mL检测缓冲液（组分B），加入20 μL Amplite™ Red储备液（250X）和10 μL H₂O₂储备液（500X），混合配制总体积为5.03 mL的MPO工作液。配制后需避光保存。

 

样品分析

表1. 96孔固体黑色微孔板中MPO标准品和测试样品的布局。 MPO =髓过氧化物酶标准品（MPO1-MPO7,0.01至10mU / mL）; BL =空白对照; TS =测试样品。

BL	BL	TS	TS
MPO1	MPO1	...	...
MPO2	MPO2	...	...
MPO3	MPO3
MPO4	MPO4
MPO5	MPO5
MPO6	MPO6
MPO7	MPO7

表2.每个孔的试剂组成。 注意，由于Amplite Red底物（非荧光产物）的过度氧化，高浓度的MPO可能导致荧光信号降低。

孔	容积	试剂
MPO1-MPO7	50ul	连续稀释（0.01至10 mU / mL）
BL	50ul	分析缓冲液（组分B）
TS	50ul	测试样本

1.按照表1和表2的布局，分别加入MPO标准品(MPO)、空白对照(BL)和测试样本(TS)：96孔板：每孔加样50 µL；384孔板：每孔加样25 µL

2.向各孔中加入MPO工作液：96孔板：每孔50 µL → 总体积100 µL/孔；384孔板：每孔25 µL → 总体积50 µL/孔

3.室温避光孵育30-60分钟

4.荧光检测模式：

激发波长：530-570 nm（最合适540 nm）

发射波长：590-600 nm（最合适590 nm）

截止波长：570 nm

备选吸光度检测模式：

将反应液转移至白色透明底微孔板

检测波长：576 ± 5 nm

注：吸光度法灵敏度低于荧光法

 

试剂应用文献

Fullerene and fullerene whisker are not carcinogenic to the lungs and pleura in rat long-term study after 2-week intra-tracheal intrapulmonary administration
Authors: Sheema, Asraful Nahar and Naiki-Ito, Aya and Kakehashi, Anna and Ahmed, Omnia Hosny Mohamed and Alexander, David B and Alexander, William T and Numano, Takamasa and Kato, Hiroyuki and Goto, Yuko and Takase, Hiroshi and others,
Journal: Archives of Toxicology (2024): 1--16