Amplite 荧光法过氧化酶检测试剂盒 近红外荧光

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产品优势  

"即混即读"型操作，适用于高通量筛选（HTS）液体处理仪器。

适用范围

用于过氧化物酶检测

产品介绍

过氧化物酶是一种小分子物质（分子量约 40 KD），通常能以 4:1 的比例与抗体偶联。由于其分子体积小，在抗体 / 抗原复合物形成过程中很少产生空间位阻问题。与其他标记酶相比，过氧化物酶价格低廉。但其主要缺点是对多种防腐剂的耐受性较低，例如叠氮化钠即使在低浓度下也会抑制过氧化物酶的活性。辣根过氧化物酶（HRP）偶联物被广泛用作酶联免疫吸附测定（ELISA）、免疫组织化学技术以及 Northern 印迹、Southern 印迹和 Western 印迹分析中的二次检测试剂。我们提供的这种 HRP 检测可在 10 分钟内完成，采用一步法均相检测系统，无需洗涤步骤。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备过氧化物酶工作溶液（50μL）
2.添加HRP标准品和/或测试样品（50μL）
3.在室温下孵育30-60分钟
4.监测Ex / Em = 640/680 nm处的荧光强度（截止= 665 nm）

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分成一次性等分试样，并在制备后储存在-20°C。 避免反复冻融。
1.1 Amplite IR过氧化物酶底物储备液（100X）：
将250μLDMSO（组分E）加入到Amplite IR过氧化物酶底物（组分A）的小瓶中以制备100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液。

1.2 HRP标准溶液（20 U / mL）：
将1mL测定缓冲液（组分C）加入到辣根过氧化物酶（组分D）的小瓶中以制备20U / mL HRP标准溶液。

1.3 H₂O₂储备溶液（20 mM）：
将22.7μL的3％H₂O₂（0.88M，组分B）加入977μL的测定缓冲液（组分C）中以制备20mM H₂O₂储备溶液。

注意：稀释的H₂O₂溶液不稳定。 应丢弃未使用的部分。

2.标准溶液

HRP标准
将15μL20U / mL HRP标准溶液加入985μL测定缓冲液（组分C）中，得到300 mU / mL HRP标准溶液（SD7）。 取300 mU / mL HRP标准溶液（SD7），进行1：3连续稀释，得到连续稀释的HRP标准品（SD6 - SD1）和分析缓冲液（组分C）。

3.工作溶液

将50μL的100X Amplite IR过氧化物酶底物储备溶液和50μL的20mM H₂O₂储备溶液加入到4.9mL的测定缓冲液（组分C）中以制备过氧化物酶工作溶液,避光。

样品分析

表1.实心黑色96孔微孔板中HRP标准品和测试样品的布局。 SD = HRP标准品（SD1-SD7,0.41至300mU / mL），BL =空白对照，TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和2中提供的布局制备HRP标准品（SD），空白对照品（BL）和测试样品（TS）。对于384孔板，每孔使用25μL试剂代替50μL。

2.向HRP标准品，空白对照和测试样品的每个孔中加入50μL过氧化物酶工作溶液，使总过氧化物酶测定体积为100μL/孔。 对于384孔板，在每个孔中加入25μL过氧化物酶工作溶液，总体积为50μL/孔。

3.在室温下孵育反应30至60分钟，避光。

4.用荧光板读数器在激发= 600-650nm，发射= 650-690nm（佳Ex / Em = 640 / 680nm，截止= 665nm）监测荧光增加。

注意：也可将板的内容物转移到白色透明底板上，并用吸光度酶标仪在647±5nm波长下读数。 与荧光读数相比，吸收检测具有较低的灵敏度。