Amplite 荧光法丙酮酸检测试剂盒

产品货期

咨询

产品优势

灵敏度高

适用范围

用于丙酮酸检测

产品介绍

丙酮酸是细胞内代谢途径中的关键化合物，源自葡萄糖代谢（糖酵解过程）。每分子葡萄糖可分解为两分子丙酮酸，并通过以下两种途径为细胞供能：在氧气充足条件下（有氧呼吸），丙酮酸经丙酮酸脱氢酶转化为乙酰辅酶A，进入三羧酸循环（又称Krebs循环）产生ATP；在缺氧环境下，丙酮酸则通过无氧代谢途径分解——动物细胞中生成乳酸，植物和微生物中则产生乙醇。丙酮酸水平异常或乳酸/丙酮酸浓度比值变化可能与肝脏疾病或代谢紊乱相关，因此成为临床诊断和实验室研究的重要指标。

AAT Bioquest品牌Amplite®荧光法丙酮酸检测试剂盒，为生物样本中的丙酮酸检测提供了高灵敏度解决方案。该试剂盒基于酶偶联反应原理：丙酮酸通过级联反应生成过氧化氢，随后通过特异性荧光传感分子，借助荧光酶标仪实现精准定量检测。

适用仪器

样品实验方案

简要概述

1.准备测试样品（50 µL）以及连续稀释的丙酮酸标准液（50 µL）
2.加入等体积的丙酮酸工作溶液（50 µL）
3.在室温下孵育30分钟至1小时
4.监测Ex / Em = 540/590 nm的荧光强度

溶液制备 

1.储备溶液

所有未使用的储备溶液应分为一次性使用的等分试样，并在制备后储存在-20°C下。 避免反复冻融。
1.1 Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液（200X）：
将55 µL DMSO（组分E）添加到Quest Fluor 丙酮酸传感器（组分A）中，制成200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液。

1.2 丙酮酸标准溶液（1 mM）：
将10 µL 100 mM丙酮酸盐（组分D）添加到990 µL PBS（pH 7）中，得到1 mM丙酮酸盐溶液。

2.标准溶液

丙酮酸标准
将100 µL的1 mM丙酮酸标准溶液加入900 µL PBS中制成100 µM丙酮酸溶液（PS7）。 然后执行1：3连续稀释以获得连续稀释的丙酮酸标准品（PS6-PS1）。

3.工作溶液

3.1 将5 mL测定缓冲液（组分C）加入一瓶酶混合1瓶（组分B1）中； 混合均匀。

3.2 将100μLddH₂O加入一个酶混合物2小瓶（组分B2）中； 混合均匀。

3.3 将整个小瓶（100μL）的Enzyme Mix 2和25 uL的200X Quest Fluor 丙酮酸传感器储备溶液转移到Enzyme Mix 1瓶中。 混合均匀。 注意：丙酮酸工作溶液不稳定，应立即使用，避免光照。

样品操作及实验分析

表1.黑色96孔微孔板中丙酮酸标准品和测试样品的布局。 PS =丙酮酸标准溶液（PS1-PS7，0.1至100 µM）； BL =空白对照； TS =测试样品。

表2.每个孔的试剂组成

1.根据表1和表2提供的布局，将丙酮酸标准液（PS），空白对照（BL）和测试样品（TS）制备成黑色的96孔微孔板。对于384孔板，请使用25 µL 每孔试剂，而不是50 µL。

2.在丙酮标准液，空白对照和测试样品的每个孔中加入50 µL丙酮酸工作溶液，使丙酮酸测定总体积为100 µL /孔。 对于384孔板，请向每个孔中添加25 µL工作溶液，总体积为50 µL /孔。 在6.5至7.0的pH值下运行丙酮酸盐测定。

3.将反应混合物在室温下孵育30分钟至1小时。

4.使用荧光板读数器在Ex / Em = 540/590 nm（截止：570 nm）下监测荧光的增加。