Amplite 硫醇定量试剂盒(荧光法)绿色荧光

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产品优势

1.高灵敏度：可检测低至 1皮摩尔 的半胱氨酸或GSH（100 µL体系浓度达10 nM）

2.操作便捷性：一步法荧光检测，流程简洁

3.兼容性强：兼容 96孔板 或 384孔板 格式，支持自动化系统

 

适用范围

用于硫醇定量

 

产品介绍

游离硫醇（包括游离半胱氨酸、谷胱甘肽及蛋白质中的半胱氨酸残基）的检测与定量是研究多种生物系统中生理过程和事件的关键任务。监测生物样本中还原型谷胱甘肽（GSH）和氧化型谷胱甘肽的水平，对于评估细胞和组织的氧化还原状态及解毒功能至关重要，这直接关系到谷胱甘肽在抵抗氧化应激和自由基介导的细胞损伤中的保护作用。半胱氨酸代谢异常会导致多种疾病，包括：胱氨酸贮积症和胱氨酸尿症。目前市场上可用于生物体系硫醇定量的试剂或检测盒数量有限，且普遍存在灵敏度不足、操作流程繁琐复杂问题

我们的 Amplite® 荧光总硫醇定量试剂盒提供了一种超灵敏的荧光测定方法，可用于定量存在于小分子中的硫醇。该试剂盒采用专有的非荧光染料，与硫醇反应后会发出强荧光。提供超灵敏的荧光检测方案：1）可检测低至1皮摩尔的半胱氨酸或GSH（100μL体系中检测限达10nM）；2）一步法荧光检测，流程简单高效；3）支持96孔板或384孔板检测格式，易于实现自动化操作

针对蛋白质硫醇基团的快速定量，我们特别推荐使用经过优化的专用试剂盒（货号#5529），该产品针对蛋白样品进行了专门优化，能够提供更准确的检测结果。

 

样品实验方案

简要概述

1.准备GSH工作溶液（50μL）

2.加入GSH标准品或测试样品（50μL）

3.室温下孵育10至60分钟

4.监测Ex / Em = 490/525 nm处的荧光强度变化（截止= 515 nm）

 

储备溶液配制

1.储备溶液配制

除非特别说明，所有未使用的储备液应分装成单次用量，并于-20 °C保存，避免反复冻融。

GSH标准溶液（1 mM）

向GSH标准品（组分C）瓶中加入200 µL ddH2O，配制成1 mM（1 nmol/µL）的GSH标准品溶液。

Thiolite Green储备液（100X）

向Thiolite™ Green（组分A）瓶中加入100 µL DMSO（组分D），配制成100X Thiolite™ Green储备液。

 

标准品溶液梯度稀释

推荐使用在线稀释计算工具：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/5524

1.取30 µL 1 mM GSH标准品溶液，加入970 µL Assay Buffer（组分B），生成30 µM（30 pmol/µL）的GSH标准品中间液。

2.以30 µM溶液为起始浓度，用Assay Buffer进行1:3的连续稀释，获得7个梯度浓度的标准品（SD7-SD1）。

注意：稀释后的GSH标准品不稳定，需在4小时内使用

 

工作溶液配制

将50 µL 100X Thiolite™ Green储备液加入5 mL Assay Buffer（组分B），混匀后即为GSH工作液。

注意事项

1.此工作液可满足一块96孔板检测，室温下不稳定，需在2小时内避光使用。

2.也可按比例调整100X储备液与Assay Buffer的用量。

3.若出现沉淀，可改用50X储备液（参见储备液配制注），即取100 µL 50X储备液加入5 mL Assay Buffer。

 

操作步骤

表1.实心黑色96孔微孔板中GSH标准品和测试样品的布局。 SD = GSH标准品（SD1  -  SD7,0.014至10μM）; BL =空白对照; TS =测试样品

BL	BL	TS	TS
SD1	SD1	...	...
SD2	SD2	...	...
SD3	SD3	...	...
SD4	SD4	...	...
SD5	SD5	...	...
SD6	SD6	...	...
SD7	SD7	...	...

 

表2.每个孔的试剂组成

孔	容积	试剂
SD1-SD7	50ul	连续稀释液（0.014至10μM）
BL	50ul	分析缓冲液
TS	50ul	测试样本

1.根据 表1 和 表2 的布局，分别加入 GSH标准品（SD）、空白对照（BL） 和 测试样品（TS）。96孔板：每孔加样 50 µL。384孔板：每孔加样 25 µL（体积减半）。

注：细胞或组织样本需按实验需求预处理

2. 加入GSH工作液。96孔板：每孔加入 50 µL GSH工作液，使总体积达到 100 µL/孔。384孔板：每孔加入 25 µL GSH工作液，使总体积达到 50 µL/孔。

3.室温（RT）避光孵育 10~60 分钟。

4.使用荧光酶标仪监测荧光强度，设定参数：激发波长（Ex） = 490 nm | 发射波长（Em） = 525 nm | 截止波长（Cutoff） = 515 nm