Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光
| Ex (nm) | 494 | Em (nm) | 515 |
| 分子量 | - | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
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适用范围
基质金属蛋白酶MMP活性检测
产品介绍
基质金属蛋白酶（MMPs）是一类锌依赖性内肽酶家族，主要在细胞外基质中发挥作用。这些酶负责分解结缔组织，在骨重塑、月经周期和组织损伤修复中具有重要作用。虽然MMPs在某些病理过程中的具体贡献难以评估，但它们在关节炎的发展以及癌症侵袭和转移过程中似乎起着关键作用。
MMPs通常具有多重底物特异性，大多数家族成员能够降解不同类型的胶原蛋白以及弹性蛋白、明胶和纤连蛋白。因此寻找对单一MMP酶具有选择性的底物十分困难。Amplite 荧光法通用型基质金属蛋白酶MMP活性检测试剂盒 绿色荧光专为检测MMP酶的总活性而设计，在使用纯化MMP酶时也可用于筛选MMP抑制剂。我们同时提供多种高活性MMP酶产品。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490nm |
| Em: | 525nm |
| Cutoff: | 515nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
96孔板测定示例
概述
添加适当的对照或测试样品（50μL）
预孵育10-15分钟
添加MMP Green™底物溶液（50μL）
孵育0分钟（用于动力学读数）或30分钟至1小时（终点读数）
在Ex / Em = 490/525 nm处监测荧光强度
注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
工作液配制
1.MMP Green™底物工作液：
将50 μL MMP Green™底物（组分A）加入5 mL检测缓冲液（组分C）中，配制总体积5.05 mL的MMP Green™底物工作液。
2.MMP稀释：
若使用纯化MMP，需用检测缓冲液（组分C）稀释至适宜浓度。注：MMP使用前需激活，避免剧烈涡旋酶溶液。
3.抑制剂与化合物稀释：
若进行MMP抑制剂筛选，请按需配制已知MMP抑制剂及测试化合物的稀释液。
样本实验方案
表1. 96孔微孔板中对照组（按需设置）与测试样本的布局安排。SC=底物对照，IC=抑制剂对照，VC=溶剂对照，TC=测试化合物对照，TS=测试样本。
SCSC......
ICIC......
VCVC
TCTC
TSTS
......
......
试剂配制说明
表2. 各孔试剂组成。
注：强荧光测试化合物可能导致假阳性结果。使用检测缓冲液（组分C）将96孔板所有对照组的总体积补足至50 µL，384孔板补足至20 µL。
| Well | Volume | Reagent |
| SC | 50 µL | Assay Buffer |
| IC | 50 µL | MMP dilutions and known MMPs inhibitors |
| VC | 50 µL | MMP dilution and vehicle used to deliver test compound |
| TC | 50 µL | MMP-containing assay buffer and test compound |
| TS | 50 µL | MMP dilution with test compound |
表3. MMP激活方案
| MMPs | Activated by treating with |
| MMP-1 (collagenase) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 3 hr |
| MMP-2 (gelatinase) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 1 hr |
| MMP-3 (stromelysin) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 24 hr |
| MMP-7 (matrilysin, PUMP-1) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 20 min - 1 hr |
| MMP-8 (neutrophil collagenase) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 1 hr |
| MMP-9 (92 kDa gelatinase) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 2 h |
| MMP-10 (stromelysin-2) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 24 hr |
| MMP-11 (stromelysin-3) | Already in active form. No APMA treatment is necessary |
| MMP-12 (macrophage elastase) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 2 hr |
| MMP-13 (collagenase-3) | 1 mM APMA (diluted component C) at 37°C for 40 min |
| MMP-14 | 1 mM APMA (diluted component C) at 37°C for 2 - 3 hr |
实验操作流程
1.按需制备含MMPs的生物样品。
2.pro-MMPs激活步骤
a.将1 M APMA（组分B）用检测缓冲液（组分C）按1:500稀释，配制2 mM APMA工作液（2X）。
注：APMA属有机汞化合物，需谨慎操作并按当地规范处置！
b.将含MMP样品或纯化MMP与等体积2 mM APMA工作液（2X）混合孵育，孵育时间参见表3。
注：酶活化需在实验前即时进行；酶样品需冰上保存；避免剧烈涡旋；活化酶长时间储存会失活；建议高蛋白浓度下激活，激活后可进一步稀释。
3按表1和表2提供的布局制备对照组与测试样本（TS）。384孔板每孔试剂体积改为20 µL（替代50 µL）。
4.若筛选MMP抑制剂，将反应板在适宜温度（如25°C或37°C）预孵育10-15分钟。
5.向检测板的样品孔和对照孔中加入50 µL（96孔板）或20 µL（384孔板）MMP Green™底物工作液，充分混匀。
6.用荧光酶标仪在Ex/Em = 490/525 nm波长下监测荧光强度。
读数模式
动态读数：立即开始测量荧光强度，每5分钟连续记录数据，持续30-60分钟。
终点读数：室温避光孵育30-60分钟，充分混匀后测量荧光强度。
试剂应用文献
Authors: Contentin, Romain and Jehl, Cassie and Commenchail, Kevin and Legendre, Florence and Gal{\'e}ra, Philippe and Cass{\'e}, Fr{\'e}d{\'e}ric and Demoor, Magali
Journal: ACS Biomaterials Science \& Engineering (2025)
Authors: Lu, Xiaojie and Yan, Yan and Cheng, Mengdan and Wu, Yiqing and Zhang, Liangliang and Xu, Bai
Journal: Small Structures (2025): 2500278
Authors: McCue, Amelia
Journal: (2024)
Authors: Boddu, Vijay Kumar and Zamzow, Piet and Kramer, Mario Wolfgang and Merseburger, Axel S and Gorantla, Sivahari Prasad and Klinger, Matthias and Cramer, Lena and Sauer, Thorben and Gemoll, Timo and von Bubnoff, Nikolas and others,
Journal: Cell Communication and Signaling (2024): 1--14
