Amplite 荧光法通用型蛋白酶活性检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

采用优化的"即混即读"检测方案，适配高通量筛选系统。

 

适用范围

用于蛋白酶检测

 

产品介绍

蛋白酶测定法广泛用于蛋白酶抑制剂的研究和蛋白酶活性的检测。监测各种蛋白酶活性已成为许多生物实验室的常规任务。

Amplite®通用荧光法蛋白酶活性检测试剂盒是进行蛋白酶分离或检测蛋白样品中污染蛋白酶的理想选择。该系列试剂盒采用荧光标记酪蛋白复合物作为广谱蛋白酶通用底物——完整底物中密集标记的荧光染料会产生显著荧光淬灭效应，而经蛋白酶催化水解后，淬灭效应解除，产生高荧光强度的染料标记短肽。荧光信号增强程度与蛋白酶活性呈正相关。试剂盒提供所有必需组分，并采用优化的"即混即读"检测方案，可轻松适配高通量筛选系统。

 

适用仪器

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荧光酶标仪
Ex:	540nm
Em:	590nm
Cutoff:	570nm
推荐孔板:	纯黑色孔板

方案一：一个96孔板的测定方案

以下说明书仅提供指南，实际应根据您的具体需求进行修改。

概述

准备蛋白酶底物溶液（50μL）

加入底物对照，阳性对照或测试样品（50μL）

孵育0分钟（用于动力学读数）或30分钟-1小时（用于终点读数）

在Ex / Em = 490 / 525nm处监测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

 

操作方法

1.准备工作解决方案：

1.1制备蛋白酶底物溶液：在2X测定缓冲液（组分C）中以1：100稀释蛋白酶底物（组分A）。在96孔板中每次测定使用50μL蛋白酶底物溶液。

注意：2X分析缓冲液（组分C）设计用于检测胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。对于其他蛋白酶，请参阅附录I了解适当的分析缓冲液配方。

1.2胰蛋白酶稀释：在去离子水中以1:50稀释胰蛋白酶（5U /μL，组分B），得到浓度为0.1U /μL。

 

2.根据说明书中的表1和表2，将步骤1中制备的试剂加入96孔微量培养板中。

 

3.运行酶促反应：

3.1将50μL蛋白酶底物溶液（来自步骤1.1）加入到测定板中的所有孔中，充分混合试剂。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光增加。

对于动力学读数：立即开始连续测量荧光强度，每5分钟记录数据30分钟。

终点读数：将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光，测量荧光强度。

  

方案二：使用纯化酶筛选蛋白酶抑制剂

概述

准备蛋白酶底物溶液（10μL）添加底物对照，阳性对照，载体对照或测试样品（90μL）

孵育0分钟（用于动力学读数）或30分钟-1小时（用于终点读数）

监测Ex的荧光强度 / Em = 490 / 525nm

 

操作方法

1.准备工作解决方案：

1.1制备1X测定缓冲液：将5mL去离子水加入5mL 2X测定缓冲液（组分C）中。

1.2制备蛋白酶底物溶液：在1X测定缓冲液（来自步骤1.1）中以1:20稀释蛋白酶底物（组分A）。使用10μL/孔的蛋白酶底物溶液用于96孔板。

注意：2X测定缓冲液（组分C）设计用于检测胰凝乳蛋白酶，胰蛋白酶，嗜热菌蛋白酶，蛋白酶K，蛋白酶XIV和人白细胞弹性蛋白酶的活性。 对于其他蛋白酶，请参阅附录I了解适当的分析缓冲液配方。

1.3蛋白酶稀释：将蛋白酶在1X测定缓冲液中稀释至浓度为500-1000nM。每个孔需要10μL蛋白酶稀释液。为所有测试样品准备适当的量，并为阳性对照和载体对照孔准备额外的量。

 

2.根据说明书中的表1和表2，将步骤1中制备的试剂加入96孔微量培养板中。

 

3.运行酶促反应：

3.1将10μL蛋白酶底物溶液（来自步骤1.2）加入阳性对照（PC），载体对照（VC）和测试样品（TS）的孔中。 充分混合试剂。

3.2用Ex / Em = 490 / 525nm的荧光板读数器监测荧光强度。

对于动力学读数：立即开始连续测量荧光强度，每5分钟记录数据30分钟。

终点读数：将反应在所需温度下孵育30至60分钟，避光。 然后测量荧光强度。