活性氧 Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

"即混即读"（mix and read）检测模式兼容高通量液体处理系统

适用范围

用于活细胞内的过氧化氢检测

产品介绍

过氧化氢（H₂O₂）是活性氧代谢过程中产生的关键分子，在多种氧化应激相关状态中起重要调控作用。该分子参与多种疾病的发生发展过程，包括哮喘、动脉粥样硬化、糖尿病血管病变、骨质疏松、多种神经退行性疾病以及唐氏综合征等。近期研究还发现，抗体能够将分子氧转化为过氧化氢，这一机制在免疫系统的正常识别和清除功能中发挥重要作用。

 Cell Meter 细胞内荧光法过氧化氢检测试剂盒采用独特的OxiVision™ Green荧光探针，可对活细胞内的过氧化氢进行精确定量。该细胞通透性探针与过氧化氢反应后产生绿色荧光信号，其优化的"即混即读"（mix and read）检测模式兼容高通量液体处理系统，为研究氧化应激调控细胞内信号通路提供了高效工具。

适用仪器

96孔板的测定方案

概述

用于溶液测定

1.准备H₂O₂反应混合物（50μL）

2.加入H₂O₂标准品或测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10-60分钟

4.在Ex / Em = 490/525 nm （cutoff=515nm）处检测荧光强度

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

用于活细胞检测

1. 在生长培养基中制备细胞

2. 使用 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液对细胞进行染色并孵育

3. 用测试化合物处理细胞

4. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515nm) 处用底部读取模式检测荧光强度

溶液配制

1. OxiVision Green 过氧化氢探针储备液 (250X)
将 50 μL DMSO（组分 D）加入 OxiVision Green 过氧化氢探针（组分 A）的小瓶中，制成 250X OxiVision Green 过氧化氢探针储备液，注意避光。

2. H2O2 标准溶液（20 mM）
将 22.7 μL 的 3% H2O2（0.88 M，组分 B）加入 977 μL 的 Assay Buffer（组分 C）中，制成 20 mM H2O2 标准溶液。

注意 稀释的 H2O2 标准溶液不稳定。 未使用的部分应丢弃。

3.H2O2 标准

将 50 μL 20 mM H2O2 标准溶液加入 950 μL Assay Buffer（组分 C）中，得到 1000 μM H2O2 标准溶液。 取 1000 μM H2O2 标准溶液并进行 1:3 的系列稀释，以得到含有测定缓冲液（组分 C）的系列稀释的 H2O2 标准品（HS1 - HS7）。

4.工作溶液配制

将 20 μL 250X OxiVision Green 过氧化氢探针储备液加入 5 mL 检测缓冲液（组分 C）中，制成 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液。

操作步骤

在上清液反应中检测H2O2
表 1. 纯黑色 96 孔微孔板中 H2O2 标准品和测试样品的布局。 HS= H 2 O 2 标准品（HS1 - HS7，300 至 0.3 μM）； BL=空白控制； TS=测试样品

表2. 每孔试剂组成

1.根据表 1 和表 2 中提供的布局准备 H2O2 标准 (HS)、空白对照 (BL) 和测试样品 (TS)。对于 384 孔板，每孔使用 25 μL 试剂，而不是 50 μL。

2. 将 50 μL OxiVision Green 过氧化氢探针工作液加入 H2O2 标准品、空白对照和测试样品的每个孔中，使H2O2 测定总体积为 100 μL/孔。 对于384孔板，将 25 μL 的 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液添加到每个孔中，总体积为 50 μL/孔。

3. 在室温下将反应孵育 15 到 30 分钟，避光。

4. 用荧光酶标仪在Ex= 490 ± 10，Em= 520 ± 10 nm（佳 Ex/Em = 490/525 nm，截止 = 515 nm）检测荧光强度。

在活细胞中进行H2O2检测

1.根据需要培养细胞

2.用 PBS 缓冲液清洗细胞，用 100 μL/孔的 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液孵育细胞 5 到 60 分钟。 对于 384 孔板，添加 25 μL/孔的 OxiVision Green 过氧化氢探针工作溶液。

3. 在 Ex/Em = 490/525 nm (Cutoff = 515 nm) 下使用荧光酶标仪（底部读取模式）检测荧光增加或使用 FITC 通道通过荧光显微镜成像荧光变化。

试剂应用文献