Cell Meter 细胞内NADH / NADPH流式细胞分析试剂盒 深红色荧光

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产品优势  

J1902 NAD(P)H能特异性结合NADH/NADPH并产生强荧光信号

适用范围

用于细胞内NADH/NADPH检测

产品介绍

细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及其磷酸酯（NADPH）的检测对疾病诊断和药物研发至关重要。NAD/NADH与NADP/NADPH氧化还原对在能量代谢、糖酵解、三羧酸循环及线粒体呼吸过程中发挥关键作用。细胞内NAD(P)H水平升高与活性氧（ROS）异常产生及DNA损伤密切相关。然而，由于缺乏高灵敏度NAD(P)H探针，生物系统内NAD(P)H的检测一直存在挑战。

Cell Meter™细胞内NADH/NADPH流式细胞分析试剂盒提供了一种高效方法，可在远红光光谱区监测活细胞内NAD(P)H水平，并兼容GFP荧光蛋白标记细胞或MitoTracker线粒体探针等其他应用。JJ1902 NAD(P)H是一种好的荧光探针，可用于细胞内NADH/NADPH的检测与成像。该探针具有荧光增强特性，能特异性结合NADH/NADPH并产生高灵敏度、高特异性的强荧光信号。JJ1902 NAD(P)H可轻松加载载至活细胞内，其荧光信号可通过流式细胞仪的APC通道便捷检测。

实验样品示例

概述

1.准备细胞（0.5  -  1×10⁶细胞/ mL）

2.将含有测试化合物和JJ1902 NAD（P）H探针的细胞在37℃孵育20-30分钟

3.洗涤细胞并重悬于检测缓冲液

4.使用流式细胞仪APC通道进行分析

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

操作方法

1.每个样品，准备0.5 mL无血清培养基或自选缓冲液，细胞密度调整为1×105至1×106个细胞/mL

注：需针对不同细胞系优化最佳细胞密度。贴壁细胞建议使用0.5 mM EDTA轻柔消化以保持细胞完整性，并用无血清培养基洗涤一次。

注：JJ1902 NAD(P)H在含血清条件下仍适用，但建议对不同细胞系进行条件优化。

2.将细胞与测试化合物在37℃孵育所需的一段时间以刺激细胞内NADH / NADPH。

注意：适当的孵育时间取决于单个细胞类型和使用的测试化合物。 优化每个实验的孵育时间。

3.向0.5 mL细胞悬液中加入1 µL JJ1902 NAD(P)H传感器（组分A），37℃孵育30-60分钟

注意：NADH/NADPH阳性对照设置：Jurkat细胞在无血清培养基中用100 µM NADH或NADPH预处理30分钟后，与JJ1902工作液共孵育30分钟（详见结果图1）。

4.用所需的缓冲液（如HHBS或DPBS）洗涤细胞一次。将细胞保存在分析缓冲液（组分B）中。

5.使用流式细胞仪APC通道检测荧光强度