Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光
| Ex (nm) | - | Em (nm) | - |
| 分子量 | N/A | 溶剂 | - |
| 存储条件 | - |
产品货期
咨询
产品优势
J1902 NAD(P)H能特异性结合NADH/NADPH并产生强荧光信号
适用范围
用于细胞内NADH/NADPH检测
产品介绍
细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NADH）及其磷酸酯（NADPH）的检测对于疾病诊断和药物研发具有重要意义。NAD/NADH与NADP/NADPH这对氧化还原辅酶在能量代谢、糖酵解、三羧酸循环及线粒体呼吸过程中起着关键作用。细胞内NAD(P)H水平升高与活性氧（ROS）异常生成及DNA损伤密切相关。然而，由于缺乏高灵敏度NAD(P)H探针，生物体系内NAD(P)H的检测一直面临挑战。
Cell Meter™细胞内NADH/NADPH荧光成像试剂盒提供了一种高效方法，可在远红光光谱区监测活细胞内NAD(P)H水平，并能兼容GFP荧光蛋白标记细胞或MitoTracker线粒体探针等多元检测场景。
Cell Meter™细胞内NADH/NADPH荧光成像试剂盒采用的JJ1902 NAD(P)H是一种性能优异的荧光探针，能特异性结合NADH/NADPH并产生强荧光信号，具有高灵敏度和高特异性。该探针可轻松加载至活细胞内，其荧光信号可通过Cy5®滤光片组进行检测。本试剂盒经过优化，适用于荧光显微成像及微孔板检测等多种应用场景。
适用仪器
| 荧光显微镜 | |
| Ex: | 590 nm |
| Em： | 655 nm |
| 推荐孔板: | 黑色透明底板 |
| 滤波片组: | Cy5 滤波片组 |
实验样品示例
概述
1.在生长培养基中制备细胞
2.将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H工作溶液在37℃孵育20 - 30分钟
3.洗涤细胞并重悬于检测缓冲液
4.使用酶标仪（底部读数模式，激发/发射=590/655nm，截止610nm）或配备Cy5®滤光片的荧光显微镜检测荧光强度
注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。
操作方法
1.制备工作溶液
取10 µL JJ1902 NAD(P)H原液（组分A）加入2.5 mL检测缓冲液（组分B），混匀。配制的工作液在室温下1小时内稳定
注意：每块96孔板约需40 µL原液。所有操作需避光进行。
细胞样本制备指南详见：
https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html
实验步骤
1.刺激NADP / NADPH，96孔板：每孔加入10 µL 10X测试化合物；384孔：板每孔加入5 µL 5X测试化合物，使用无血清培养基或PBS/HHBS等缓冲液。 对照孔（未处理的细胞），加入等量培养基或缓冲液
注意：JJ1902 NAD（P）H在含血清条件下仍适用，建议针对不同细胞系优化条件
2.在细胞板中，96孔板：每孔加入100 µL JJ1902 NAD（P）H工作液，384孔板：每孔加入25 µL JJ1902 NAD（P）H工作液，将细胞与测试化合物和JJ1902 NAD（P）H工作溶液 37℃避光共孵育20-30分钟
注意：对于NADH / NADPH阳性对照处理：将HeLa细胞与100μMNADH或NADPH在无血清培养基中孵育30分钟，并与JJ1902 NAD（P）H探针工作溶液在37℃下共培养30分钟。 详细信息请参见图1。
3.用所需缓冲液洗涤细胞一次。移除每个孔中的溶液，96孔板：加入100μL/孔的测定缓冲液（组分B），384孔板：加入5μL/孔
4.酶标仪检测：底部读数模式，Ex/Em=590/655nm（截止610nm）或 荧光显微镜观察：使用Cy5®滤光片组拍摄图像
