Cell Meter 胞内NADH / NADPH荧光成像分析试剂盒

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产品优势

1.可轻松加载至活细胞内

2.适配Cy3®或TRITC滤光片系统进行荧光监测

3.经优化适用于荧光显微成像和酶标仪检测

适用范围

用于细胞内NADH/NADPH检测

产品介绍

细胞内二氢烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)及其磷酸酯(NADPH)的检测对疾病诊断和药物研发至关重要。NAD/NADH和NADP/NADPH这两对氧化还原辅酶在能量代谢、糖酵解、三羧酸循环和线粒体呼吸等过程中起关键作用。细胞中NAD(P)H水平升高与活性氧(ROS)异常产生及DNA损伤密切相关。然而，由于缺乏高灵敏度的NAD(P)H探针，生物系统内NAD(P)H的检测一直面临挑战。

Cell Meter™细胞内NADH/NADPH荧光成像试剂盒为活细胞NAD(P)H水平监测提供了高效方法。其核心成分JZL1707 NAD(P)H探针是一种性能优异的荧光探针，能特异性结合NADH/NADPH并产生高灵敏度荧光信号。该探针可轻松加载至活细胞，并可通过Cy3®或TRITC滤光片系统便捷监测荧光信号。本试剂盒经过优化，适用于荧光显微成像和酶标仪检测。

实验示例

概述

1.在生长培养基中制备细胞

2.将细胞与测试化合物和JZL1707 NAD（P）H工作溶液在37℃共孵育30-60分钟

3.洗涤细胞并置于检测缓冲液中

4.酶标仪检测：采用底读模式，激发/发射波长=540/590 nm（截止波长570 nm）

   荧光显微镜观察：使用TRITC滤光片组 

工作液配制

取10 µL JZL1707 NAD(P)H原液（组分A）加入2.5 mL检测缓冲液（组分B），混匀配制成工作液

注意：工作液在室温下可稳定保存1小时（需避光）

          每个96孔板约需40 µL原液

细胞样本制备指南详见：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

实验方案

1.刺激NADP / NADPH：96孔板：加入10 µL 10X测试化合物； 384孔板：加入5 µL 5X测试化合物（无血清培养基或PBS/HHBS等缓冲液）；  对照孔（未处理的细胞）：加入等量培养基或缓冲液

注意：JZL1707 NAD（P）H对血清敏感，因此建议将细胞保存在无血清培养基或您选择的缓冲液中。或者，可以在常全培养基中制备和处理细胞。 与JZL1707 NAD（P）H一起孵育时，更换为无血清培养基或缓冲液。

2.在细胞板中加JZL1707 NAD（P）H工作溶液：96孔板：每孔加入100 µL工作液 ；384孔板：每孔加入25 µL工作液，37°C避光孵育30-60分钟

注意：对于NADH / NADPH阳性对照：HeLa细胞用100 µM NADH/NADPH在无血清培养基中孵育30分钟后，再加入JZL1707 NAD（P）H工作液在37℃孵育30分钟

3.用所需缓冲液洗涤细胞一次。 移除每个孔中的溶液，并96孔板添加100μL/孔的测定缓冲液（组分B） 或  384孔板添加25μL

4.酶标仪：底部读数模式，Ex/Em=540/590 nm（Cutoff=570 nm）或者 荧光显微镜：使用Cy3®或TRITC滤光片组观察

试剂应用文献

Multi-photon, label-free photoacoustic and optical imaging of NADH in brain cells
Authors: Osaki, Tatsuya and Lee, W David and Zhang, Xiang and Zubajlo, Rebecca E and Balcells-Camps, Mercedes and Edelman, Elazer R and Anthony, Brian W and Sur, Mriganka and So, Peter TC
Journal: Light: Science \& Applications (2025): 264