活性氧 DCFH-DA(H2DCFDA) [2'，7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯] CAS 4091-99-0

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适用范围

用于细胞氧化还原的过程监测

产品介绍

DCFH-DA（2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯，亦称2',7'-二氯荧光素二乙酸酯）可被细胞酯酶水解生成2',7'-二氯二氢荧光素（又称2',7'-二氯荧光素），随后主要被过氧化氢（H₂O₂）氧化为2',7'-二氯荧光素。该探针可能参与多种氧化反应，这些反应在细胞内氧化应激状态下会显著增强，因此被广泛应用于细胞氧化还原过程的监测

储备溶液配制

除非另有说明，所有未使用的母液应分装为单次使用量，配制后保存于-20°C，避免反复冻融。

2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯储备溶液：

用DMSO配制1-10 mM的储备溶液。

注：未使用的DMSO储备溶液需分装至单次使用管中，-20°C避光保存

工作液配制

2',7'-二氯二氢荧光素二乙酸酯工作液：

用生理缓冲液（如PBS、HBSS、HEPES缓冲液）配制1-10 µM的工作液。

注：最合适工作浓度需根据具体实验条件进行优化。

以下操作步骤为通用实验指南，请根据具体实验需求进行调整优化。

1.移除细胞生长培养基后，加入染料工作液，室温或37°C孵育5-60分钟。

2.吸除染料工作液，用预热的HBSS缓冲液洗涤细胞，随后加入预热的HBSS或生长培养基，在最佳温度下继续孵育。

注意：不同细胞类型的酯酶活性差异较大，最佳恢复时间需根据具体情况确定。

3.在施加实验刺激前，必须先测定负载染料细胞的基线荧光强度。

4.需检测未染色细胞在绿色荧光发射波段的自身荧光水平。

5.进行流式检测时，必须确认细胞经染料负载和处理后，其前向散射(FSC)和侧向散射(SSC)参数未发生改变。若出现细胞尺寸变化，可能是由于操作导致的细胞膜起泡(blebbing)或收缩，亦或是毒性反应的表现。

6.需同时检测含染料的缓冲液/培养基 和 含染料+诱导剂的缓冲液/培养基两种体系的荧光值

注：在缺乏胞外酯酶和其他氧化酶的情况下，荧光值的逐渐升高可能源于：染料自发水解、 空气氧化作用、光诱导氧化反应

7.对持续培养在生长培养基或基础缓冲液中的负载染料细胞（未处理组）进行荧光监测。健康细胞可通过自身酶系统和天然抗氧化剂清除氧自由基，在染料负载恢复期后应表现为：低水平且相对稳定的基础荧光；可能出现的异常情况：荧光中逐渐增加（由于自身氧化）或减少（由于细胞或光漂白的损失）

特别警示：若未受刺激的健康对照细胞突然出现荧光爆发式增强，可能预示细胞进入死亡进程或其他氧化应激事件。

8.建议使用过氧化氢(H₂O₂)、 叔丁基过氧化氢(TBHP)刺激阳性对照：终浓度建议：~100 µM（需根据细胞敏感性和反应性调整浓度）

试剂应用文献