细胞膜荧光探针DiOC5(3),碘化物

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产品优势  

DiO是一种疏水性荧光染料，可特异性标记细胞膜及其他疏水性结构

 

适用范围

用于标记细胞膜

 

产品介绍

DiI、DiO、DiD和DiR是一类亲脂性荧光染料，专门用于标记细胞膜和其他疏水性结构。这些环境敏感型染料在水溶液中荧光较弱，但当其嵌入细胞膜或与蛋白质等亲脂性生物分子结合时，荧光强度会显著增强。它们具有高消光系数、极性依赖性荧光和短激发态寿命等特点。当应用于细胞时，这些染料能够在细胞质膜中横向扩散，在合适的浓度下实现整个细胞的均匀染色。DiI（橙红色荧光）、DiO（绿色荧光）、DiD（红色荧光）和DiR（深红色荧光）具有不同的荧光颜色，为活细胞的多色成像和流式细胞分析提供了便利工具。

DiO和DiI可分别与标准的FITC和TRITC滤光片兼容使用；

DiD能被633 nm He-Ne激光有效激发，其激发和发射波长比DiI更长，可作为标记具有强自发荧光的细胞和组织的重要替代方案；

DiR由于红外光在细胞和组织中的高效穿透性以及红外区域极低的自发荧光水平，是体内成像和示踪研究的理想选择。

Di系列染料	特点	选择建议
DiO染料（绿色）	活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。荧光强度低于DiI。对某些固定组织的染色效果一般。	DiI, DiO, DiD 和 DiR均可染色活细胞或固定细胞及组织（请您根据您的需求选择相应的探针），DiI比DiO荧光更亮；DiD，DiR波长更长，更适合组织染色；
DiA染料（绿色）	一种细胞膜绿色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiO 快，并且经常和 DiI 一起使用于细胞膜双色标记。可以进行染色后的固定。DiA 对固定细胞的染色效果比 DiO 好。
DiI染料（橙色）	活细胞或固定细胞、组织的的长期示踪剂。除标记细胞膜外，还可以检测细胞的融合和粘附、细胞迁移等。
DiB染料（橘色）	一种检测细胞膜电位的亲脂性阴离子荧光染料，它本身无荧光，当进人细胞与胞浆内的蛋白质结合后才发出荧光。当它进入细胞后，指示细胞内荧光强度增加，即膜电位增加表示细胞去极化；反之，若细胞内荧光强度降低，即膜电位降低表示细胞超极化。
DiD染料（红色）	染色效率高，均一，不易猝灭，细胞毒性低，背景干扰小。
DiS染料（红色）	一种细胞膜红色荧光染料，它在细胞膜中的扩散速度比 DiD快，可以进行染色后的固定。DiS 对固定细胞的染色效果比 DiD好。
DiR染料（深红色）	常用于标记细胞膜，红外荧光可以穿透细胞和组织，在活体成像中用来示踪。DiR可以进行染色后的固定。

 

细胞膜荧光探针（DiO/DiI/DiD/DiS/DiR）标记操作流程

DiO，DiI，DiD，DiS或DiR膜染色溶液：

DMSO或EtOH储备液：

使用DMSO或乙醇配制1-5 mM储备液

注意：未使用的母液需-20℃避光保存，避免反复冻融

 

工作溶液：

用无血清培养基、HBSS或PBS稀释储备液，配制1-5 μM工作液

注意：合适的工作浓度需根据细胞类型优化，建议测试至少10倍浓度梯度

 

悬浮细胞

1. 将细胞以1×10⁶/mL的密度悬浮于染料工作液中

2. 37℃孵育2-20分钟（不同细胞类型需优化时间，建议从20分钟开始测试）

3. 1000-1500 rpm离心5分钟

4.取出上清液，将细胞重新悬浮在预热（37°C）的生长培养基中

5.重复洗涤2次（步骤同3-4）

 

 贴壁细胞

1.在无菌玻璃盖玻片上培养贴壁细胞。

2.从生长培养基中取出盖玻片，轻轻地沥出多余的培养基。 将盖玻片放在湿度箱中。

3.加入100 μL染料工作液，轻摇使液体覆盖全部细胞

4. 37°C孵育2-20分钟。 （不同细胞类型需优化时间，建议从20分钟开始测试）

5.排出染料工作溶液，用生长培养基清洗盖玻片2-3次。（每次加入培养基后孵育5-10分钟）

 

4.显微镜检测：

1.说明书中的表1总结了DiD，DiO，DiI，DiS和DiR滤波器组的选择。

2.为了同时检测多种染料，可提供如下多波段滤波器组：

a）DiI和DiO = Omega XF52，Chroma 51004

b）DiI和DiD = Omega XF92，Chroma 51007

c）DiI，DiO和DiD = Omega XF93，Chroma 61005

 

5.流式细胞仪检测：

各染料对应检测通道：

DiO→FL1 | DiI→FL2 | DiD→FL3 | DiS/DiR→FL4