Helixyte Green 双链DNA定量试剂
| Ex (nm) | 502 | Em (nm) | 522 |
| 分子量 | 661.17 | 溶剂 | DMSO |
| 存储条件 | 在零下15度以下保存, 避免光照 |
产品货期
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产品介绍
Helixyte™ Green 是一种核酸探针，在与双链 DNA（dsDNA）结合时会表现出显著的荧光增强。它具有与 PicoGreen® 相同的光谱特性，因此是 PicoGreen®（PicoGreen® 为 Invitrogen 的商标）的理想替代品。测量核酸浓度最常用的技术是测定 260 nm 处的吸光度（A260）。然而，吸光度法极易受到核酸制备物中常见各种污染物（如核苷酸、单链核酸和蛋白质）的严重干扰。Helixyte™ Green dsDNA 定量试剂在灵敏度和选择性上均有极大提升，是定量 DNA 的理想替代方案。
Helixyte™ Green dsDNA 定量试剂是一种超灵敏的荧光核酸染色剂，用于在分子生物学操作（如文库构建中的 cDNA 合成、亚克隆中的 DNA 片段纯化）以及诊断应用（如定量 DNA 扩增产物和引物延伸分析）中对双链 DNA（dsDNA）进行定量。使用该试剂，您可以在单链 DNA、RNA 和游离核苷酸存在的条件下，选择性地检测低至 25 pg/ml 的 dsDNA。该检测方法在三个数量级范围内呈线性，且序列依赖性小，可让您准确测量多种来源的 DNA，包括基因组 DNA、病毒 DNA、质粒小提 DNA 或 PCR 扩增产物。
Helixyte™ Green dsDNA 定量试剂的灵敏度比紫外吸光度读数高出数个数量级，从而节省宝贵样品。在等摩尔量 RNA 存在下，该试剂对 dsDNA 具有特异性。
适用仪器
| 荧光酶标仪 | |
| Ex: | 490 nm |
| Em： | 525 nm |
| Cutoff： | 515 nm |
| 推荐孔板: | 纯黑色孔板 |
分析方案
以下方案是使用Helixyte Green 定量dsDNA的实例。 在打开样品瓶之前，让Helixyte Green 温热至室温。
注意：没有数据可用于解决Helixyte Green dsDNA染色的致突变性或毒性。 因为这种试剂与核酸结合，所以应将其作为潜在的诱变剂进行处理，并进行适当的处理。 应特别小心处理DMSO储备溶液，因为已知DMSO有助于有机分子进入组织。
1.准备Helixyte Green 工作解决方案：
1.1通过在TE（10mM Tris-HCl，1mM EDTA，pH 7.5-8.0）中浓缩DMSO溶液200倍稀释，制备Helixyte Green的水性工作溶液。 例如，将50μLHelixyteGreen添加至10 mL TE，以制备足够的工作溶液，以在200μL终体积中测定100个样品。通过用铝箔覆盖或将其置于黑暗中来保护工作溶液免受光照。
注1：我们建议将此溶液用塑料容器而不是玻璃制备，因为染料可能会吸附到玻璃表面。
注2：为获得佳结果，该溶液应在制备后几小时内使用。
2.准备dsDNA标准品的连续稀释液（0至3 ng / mL）：
2.1在ddH2O中制备1mg / mL的dsDNA原液（如来自Sigma的小牛胸腺DNA）。
2.2将10μL1mg / mL dsDNA原液（步骤2.1）加入到998 L TE缓冲液中，得到10μg/ mL dsDNA溶液，然后进行1:10和1：2连续稀释，得到1000,100,50,25 ，12.5,6.25,3.125和0 ng / mL。
2.3如说明书中的表1和2中所述，将dsDNA标准品和含有测试样品的DNA添加到96孔固体黑色微孔板中。
3.运行dsDNA测定：
3.1将100μLdsDNA测定混合物（来自步骤1.1）添加至dsDNA标准品的每个孔，空白对照和测试样品（参见步骤2.3）以使总dsDNA测定体积为200μL/孔。
注1：对于384孔板，每孔加入25μL样品和25μLdsDNA测定混合物。
注2：对于基于曲线的测定，每曲线添加1mL样品和1mL dsDNA测定混合物。
3.2在室温下孵育反应5至10分钟，避光。
3.3使用荧光酶标仪在Ex / Em = 490 / 525nm（在515nm处截止）观察荧光增加。
3.4空白孔中的荧光（仅含TE缓冲液）用作对照，并从具有dsDNA反应的那些孔的值中减去。 从DNA标准曲线中产生的标准曲线确定样品的DNA浓度。
试剂应用文献
