Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒

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产品优势

1.可在 ssDNA、RNA 和游离核苷酸存在的条件下，选择性检测低至 25 pg/ml 的双链 DNA

2.采用“混合即读”模式，操作简便且稳定性好

产品介绍

Helixyte™ Green dsDNA 定量检测试剂盒可在 ssDNA、RNA 和游离核苷酸存在的条件下，选择性检测低至 25 pg/ml 的双链 DNA。Helixyte™ Green 与 dsDNA 结合后荧光信号显著增强。该检测方法在三个数量级范围内呈线性响应，且序列依赖性低，可准确测量来自多种来源的 DNA，包括基因组 DNA、病毒 DNA、质粒小提 DNA 或 PCR 扩增产物。

Helixyte™ Green dsDNA 定量检测试剂的灵敏度比紫外吸光度读数高出数个数量级。在等摩尔 RNA 存在下，该试剂对 dsDNA 具有特异性。该试剂盒采用“混合即读”模式，操作简便且稳定性好。可配合台式荧光计或手持式荧光计（例如 Qubit 荧光计）使用。本试剂盒是 Quant-iT™ PicoGreen® dsDNA 检测试剂盒（Quant-iT™ 和 PicoGreen® 为 Invitrogen 的商标）的理想替代品。

样品实验方案

实验概要

1.向每个比色皿中加入 1 mL dsDNA 标准品或待测样品。

2.加入 1 mL Helixyte Green™ 工作液。

3.室温孵育 5 至 10 分钟。

4.在激发波长 490 nm / 发射波长 525 nm 处监测荧光。

重要说明

以下方案是使用 Helixyte Green™ 定量 dsDNA 的示例。开瓶前，请将所有组分恢复至室温。目前尚无关于 Helixyte Green™ dsDNA 染色剂致突变性或毒性的数据。但由于该试剂可与核酸结合，应将其视为潜在的致突变物，并谨慎操作。处理 DMSO 储备液时需特别小心，因为已知 DMSO 可促进有机分子进入组织。

储备液制备

除非另有说明，所有未使用的储备液在配制后应分装成单次使用的小份，并储存于 -20°C。避免反复冻融。

检测缓冲液（1X）

将浓缩缓冲液用无菌、蒸馏、无DNase的水稀释20倍，配制成1X检测缓冲液。

标准品溶液的制备

为方便起见，可使用连续稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/17651

dsDNA标准品

用于高范围标准曲线：

取30 µL 100 µg/mL dsDNA储备液（组分C）加入1.47 mL 1X检测缓冲液中，得到2000 ng/mL的dsDNA溶液，然后进行1:2和1:10的连续稀释，获得1000、100、10、1和0 ng/mL的浓度。

用于低范围标准曲线：

取40 µL 2 µg/mL dsDNA储备液加入1.56 mL 1X检测缓冲液中，得到50 ng/mL的dsDNA溶液，然后进行1:2和1:10的连续稀释，获得25、2.5、0.25、0.025和0 ng/mL的浓度。

工作液的制备

Helixyte Green™ 工作液

配制Helixyte Green™工作液时，将浓缩的DMSO溶液在1X检测缓冲液中稀释200倍。例如，要配制足够用于10个样品（每个样品终体积2 mL）的工作液，可取50 µL Helixyte Green™（组分A）加入10 mL检测缓冲液（组分B）中。用锡箔纸包裹或置于避光处，以保护工作液免受光照。

注意： 建议使用塑料容器配制该溶液，因为染料可能吸附在玻璃表面。为获得好的性能，请在配制后数小时内使用该溶液。

样品实验流程

1.向每个含有1 mL dsDNA标准品、空白对照和待测样品的比色皿中加入1 mL Helixyte Green™工作液。这样每个比色皿中dsDNA测定的总体积为2 mL。

2.室温避光孵育反应5-10分钟。

3.使用荧光分光光度计监测荧光增强，设置参数为：激发/发射波长 = 490/525 nm，截止波长 = 515 nm。

注意： 为尽量减少光漂白效应，所有样品的荧光测量时间应保持一致。

试剂应用文献