MMP Green 基质金属蛋白酶绿色荧光底物

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适用范围

MMP Green 基质金属蛋白酶绿色

 

产品介绍

基质金属蛋白酶（MMPs）是一类锌依赖性内肽酶家族，主要作用于细胞外基质。这些酶负责分解结缔组织，在骨重塑、月经周期和组织损伤修复过程中具有重要作用。虽然MMPs在某些病理过程中的具体贡献难以评估，但它们在关节炎的发展以及癌症侵袭和转移过程中均发挥关键作用。

MMPs通常具有多重底物特异性，大多数家族成员能够降解不同类型的胶原蛋白以及弹性蛋白、明胶和纤连蛋白，因此难以找到对单一MMP酶具有选择性的底物。MMP Green 基质金属蛋白酶绿色荧光底物专为监测MMP酶的整体活性而设计，在使用纯化MMP酶时也可用于筛选MMP抑制剂。

MMP Green 基质金属蛋白酶绿色基于TF2/TQ2荧光共振能量转移对构建。经MMP水解后，由于TF2/TQ2 FRET对发生分离，MMP Green™ FRET肽底物的荧光强度显著增强，其荧光增强程度与MMP酶活性成正比。

实验方案摘要

1.加入含/不含APMA的对照或测试样品（50 µL）

2.预孵育10-15分钟

3.加入MMP Green™底物工作液（50 µL）

4.动力学读数无需孵育，终点读数需孵育30-60分钟

5.于Ex/Em = 490/525 nm监测荧光强度

重要提示

实验前需将试剂（包括底物）恢复至室温。按需制备含MMPs的生物样品。

储备液配制

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用量，于-20°C保存并避免反复冻融。

MMP Green™底物储备液

对于Cat# 13520：向MMP Green™底物瓶中加入适量DMSO，配制1-10 mg/mL储备液

注：储备液需分装为单次使用量并避光保存

 

工作液制备

MMP Green™底物工作液

对于Cat# 13520：用自选缓冲液配制20-100 µg/mL MMP Green™底物工作液
对于Cat# 13519：将50 µL MMP Green™溶液（提供试剂瓶）加入5 mL自选缓冲液中

 

表1. MMP活化方案

MMPs	Activated by treating with
MMP-1 (collagenase)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 3 hr
MMP-2 (gelatinase)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 1 hr
MMP-3 (stromelysin)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 24 hr
MMP-7 (matrilysin, PUMP-1)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 20 min - 1 hr
MMP-8 (neutrophil collagenase)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 1 hr
MMP-9 (92 kDa gelatinase)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 2 h
MMP-10 (stromelysin-2)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 24 hr
MMP-11 (stromelysin-3)	Already in active form. No APMA treatment is necessary
MMP-12 (macrophage elastase)	1 mM APMA (diluted component C) at 37 °C for 2 hr
MMP-13 (collagenase-3)	1 mM APMA (diluted component C) at 37°C for 40 min
MMP-14	1 mM APMA (diluted component C) at 37°C for 2 - 3 hr

 

实验操作流程

1.按需制备含MMPs的生物样品。

2.pro-MMPs激活步骤

向反应板中加入2 mM APMA工作液（2X）。

注：APMA属有机汞化合物，需谨慎操作并按当地规范处置！

将含MMP样品或纯化MMP与等体积2 mM APMA工作液（2X）混合孵育，孵育时间参见表1。酶活化需在实验前即时进行。

注：酶样品需冰上保存；避免剧烈涡旋；活化酶长时间储存会失活；建议高蛋白浓度下激活，激活后可进一步稀释。

2.按每孔50 µL制备对照组与测试样本（TS）。384孔板每孔试剂体积改为20 µL（替代50 µL）。

3.若筛选MMP抑制剂，将反应板在适宜温度（如25°C或37°C）预孵育10-15分钟。

4.向检测板的样品孔和对照孔中加入50 µL（96孔板）或20 µL（384孔板）MMP Green™底物工作液，充分混匀。

5.用荧光酶标仪在Ex/Em = 490/525 nm波长下监测荧光强度：

动力学读数：立即开始测量，每5分钟记录数据持续30-60分钟

终点读数：室温避光孵育30-60分钟，混匀后测量