ReadiLink BSA偶联试剂盒

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产品介绍

牛血清白蛋白（BSA）是一种具有多种生化应用的血浆白蛋白，广泛应用于酶联免疫吸附试验（ELISA）、免疫印迹和免疫组织化学等技术。作为血浆中最丰富的蛋白质之一，BSA具有极高的稳定性和溶解性。这种分子量为67 kDa的蛋白质结构复杂且具有完全免疫原性，其分子表面含有多个可供胺基反应性或羧基反应性交联剂结合的位点，能有效偶联多肽及其他抗原。因此，BSA常被用作载体蛋白，通过与半抗原或其他弱免疫原性物质偶联来增强其免疫原性，促进抗体产生。

本ReadiLink™ BSA偶联试剂盒专为快速制备免疫用半抗原-载体蛋白偶联物而优化，采用羧基反应性碳二亚胺作为交联剂，通过一步法实现半抗原与载体蛋白的偶联。所得偶联物可用于激发针对半抗原的免疫反应和抗体生产。该碳二亚胺交联剂能与多肽和蛋白质表面暴露的羧基和氨基基团反应，形成稳定共价键。

试剂盒包含：经特殊缓冲体系处理的BSA（确保与碳二亚胺反应兼容）；

                    高效脱盐离心柱（通过简单离心步骤即可实现优异的蛋白回收率） 

样品实验方案

简要概述

1.准备蛋白质溶液
2.准备半抗原解决方案
3.将蛋白质与半抗原混合到EDC中
4.在室温下孵育反应2小时
5.通过脱盐来纯化缀合物

操作步骤

1.准备BSA-Hepten共轭：

1.1将200μLDdH2 O加入到BSA（组分A）的小瓶中以制备10mg / mL溶液。

1.2在450μL缀合缓冲液（组分B）中溶解最多2mg半抗原。

注意：一些半抗原可能具有有限的溶解度，使用DMSO（在最终的缀合溶液中<30％）首先溶解它。较高浓度的DMSO可能使载体蛋白不可逆地变性。

1.3将450μL半抗原溶液加入200μLBSA溶液中，得到Hapten-BSA混合溶液。

1.4将Hapten-BSA溶液加入一小瓶EDC（10mg）（组分C）中，通过温和混合溶解。在室温下孵育2小时。

1.5通过脱盐纯化缀合物以除去未反应的交联剂和蛋白质防腐剂（例如叠氮化钠）。

2.纯化BSA-Hepten结合物：

2.1使用前将1瓶纯化缓冲液（组分D）解冻至室温。未使用的缓冲液可以在4°C下储存1周。

2.2拧下脱盐柱（组件E）的底部盖子并松开盖子。将色谱柱放入收集管中。

2.3将柱以1,000g离心2分钟以除去储存溶液。

2.4取下盖子，慢慢地向柱子中加入1 mL纯化缓冲液。以1,000g离心2分钟，取出缓冲液。再重复此步骤3次，从收集管中丢弃缓冲液。

2.5将色谱柱放入新的收集管中，轻轻地将样品放入紧凑树脂床的中心。

2.6将柱以1,000g离心2分钟以收集样品。

2.7现在可以将Hapten-BSA缀合物用于免疫。如果要将Hapten-BSA缀合物储存超过几天，则对缀合物进行无菌过滤，并在4°C或-20°C下储存。

注意：如果在一周内使用缀合物，可以使用PBS进行纯化。如果要冷冻缀合物，使用纯化缓冲盐（组分D）进行纯化。如果在缀合中使用DMSO，则制备具有相同百分比的用于缀合的DMSO的纯化缓冲盐。这将使脱盐期间塔中的沉淀最小化。如果在缀合过程中形成沉淀，则将沉淀的材料离心，收集上清液并保存沉淀物。净化上清液。将沉淀物与纯化的缀合物合并。