ReadiLink KLH偶联试剂盒

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产品介绍

钥匙孔血蓝蛋白（KLH）是用于肽段偶联制备抗体的最常用载体蛋白之一。人工养殖钥匙孔血蓝蛋白（mcKLH）源自南美螺（Concholepas concholepas）软体动物，其免疫原性与KLH相似，但作为半抗原和肽段抗体制备的载体蛋白具有更高的稳定性和效率。每个mcKLH分子含有多个位点，可通过胺基反应性或羧基反应性交联剂实现与肽段及其他抗原的高效偶联。目前，mcKLH已成为针对半抗原或肽段生产抗体的行业金标准。

本ReadiLink™ KLH偶联试剂盒主要针对免疫和抗体制备所需的半抗原-载体偶联物进行优化设计。该试剂盒采用羧基反应性碳二亚胺作为交联剂，实现半抗原与载体蛋白的一步法偶联，所得偶联物可用于激发针对半抗原的免疫反应及抗体生成。羧基反应性碳二亚胺能与肽段和蛋白质表面暴露的羧基及氨基基团反应，形成稳定共价键。

试剂盒核心组分包括：特殊缓冲体系配制的mcKLH（确保与羧基反应性碳二亚胺的兼容性）

                                  脱盐离心柱——通过简易离心步骤即可实现优异的蛋白回收率

样品实验方案

简要概述

1.准备蛋白质溶液
2.准备半抗原解决方案
3.将蛋白质与半抗原混合到EDC中
4.在室温下孵育反应2小时
5.通过脱盐来纯化缀合物

工作溶液配制

1. mcKLH溶液（10 mg / mL）：
将200μLddH2 O加入到mcKLH（组分A）的小瓶中以制备10mg / mL溶液。

注意：mcKLH溶液通常呈半透明至白蓝色。 不要涡旋或加热溶液，否则会使载体沉淀。

2. Hapten工作溶液：
在450μL缀合缓冲液（组分B）中溶解最多2mg半抗原。

注意：一些半抗原可能具有有限的溶解度，使用DMSO（在最终的缀合溶液中≤30％）首先溶解它。 较高浓度的DMSO可能使载体蛋白不可逆地变性。

3. KLH-Hapten工作溶液：
将450μL半抗原溶液加入200μLmcKLH溶液中，得到KLH-Hapten工作溶液。

操作步骤

1.KLH-Hapten结合

1.1将一小瓶EDC（组分C，10mg）溶解在1mL ddH 2 O中，立即将50μL该溶液加入KLH-Hapten工作溶液中，轻轻混合。在室温下孵育2小时。通过脱盐纯化缀合物以除去未反应的交联剂和蛋白质防腐剂（例如叠氮化钠）。

1.2拧下脱盐柱（组件E）的底部盖子，然后松开盖子。将色谱柱放入收集管中。

1.3将柱以1,000g离心2分钟以除去储存溶液。

1.4取下盖子，慢慢地向柱子中加入1 mL纯化缓冲液。以1,000g离心2分钟，取出缓冲液。再重复此步骤3次，从收集管中丢弃缓冲液。

1.5将色谱柱放入新的收集管中，轻轻地将样品放入紧凑树脂床的中心。

1.6将柱以1,000g离心2分钟以收集样品。

1.7KLH-Hapten缀合物现在可用于免疫。如果KLH-Hapten缀合物要储存超过几天，则无菌过滤缀合物，并储存在4°C或-20°C。

注意：如果在一周内使用缀合物，可以使用PBS进行纯化。如果缀合物将被冷冻，则使用纯化缓冲盐（组分D）进行纯化。如果在缀合中使用DMSO，则制备具有相同百分比的用于缀合的DMSO的纯化缓冲盐。这将使脱盐期间塔中的沉淀最小化。如果在缀合过程中形成沉淀，则将沉淀的材料离心，收集上清液并保存沉淀物。纯化上清液。将沉淀物与纯化的缀合物合并。