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百萤小科普:如何检测细胞增殖?

许多小伙伴不知道自己检测细胞增殖的时候究竟该检测什么?使用哪些试剂?今天,百萤将总结的可以测量细胞增殖的方法、试剂、适用仪器等分享给大家。


细胞增殖可以通过测量诸如新合成的DNA、总核酸含量或细胞分裂等参数来确定(见表1)。 最简单的方法是使用可与胺反应的细胞跟踪指示剂(例如CytoTell 染料)监视细胞分裂,这些可渗透细胞的指示剂与细胞质蛋白共价结合。由于这种共价偶联反应,CytoTell 染料无法转移到相邻细胞中,并且可以在细胞中保留好几代(最多可以观察到9代)。随着细胞分裂,CytoTell 染料在子细胞之间均等分布,并且每一代新细胞的荧光强度均是其亲本的一半。可以使用标准的含甲醛固定剂和基于皂苷的透化缓冲液对用CytoTell 染料标记的细胞进行固定和透化,以进行进一步的细胞内分析。

表1.用于检测细胞增殖的试剂和检测列表。

检测类型 原理 试剂/测定 仪器

检测细胞分裂

使用与细胞质蛋白结合的可渗透细胞的染料。(随着细胞分裂,染料被转移到子细胞。新一代细胞的荧光强度是其亲本的一半。)

CytoTell 染料

荧光酶标仪,荧光显微镜或流式细胞仪

CytoTrace 染料

ReadiUse CFSE

检测新合成的DNA

在细胞周期的S期将修饰的核苷酸掺入新合成的DNA中。一旦掺入,这些核苷类似物就可以用作细胞周期和增殖标记物,可以使用标记的探针进行检测以鉴定增殖细胞。

Bucculite dT掺入细胞增殖荧光成像试剂盒

荧光显微镜

BrdU  (需要酶或荧光团标记的抗BrdU抗体)

可适用于比色,荧光或化学发光仪器

检测总核酸含量

使用可渗透细胞的核酸染色剂,该试剂能展现出与DNA质量成比例的发射信号。然后对染色的群体进行流式细胞术分析,以生成DNA直方图,观察细胞周期每个阶段中细胞的百分比。

Cell Meter 荧光活细胞周期检测

流式细胞仪

Cell Meter 荧光固定细胞周期检测

核紫 LCS1 活细胞染料

Hoechst 33258,Hoechst 33342  和  DAPI


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