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荧光谷胱甘肽分析试剂盒问答

1.Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率测定法如何工作?该测定实际量化了什么?

答:Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率测定试剂盒*绿色荧光*(货号10056)包含仅与还原型谷胱甘肽(即GSH)反应而不与GSSG反应的探针。通过测量还原前的GSH浓度和还原后的总GSH浓度,用户可以计算GSSG浓度以及GSH / GSSG比率。有关特定的方程式和过程,请查阅我们的示例协议。

2.我的Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析试剂盒的GSH和总GSH校准曲线是否有问题?为什么我的标准曲线没有意义?

答:从理论上讲,谷胱甘肽和总谷胱甘肽的校准曲线应相当接近。要记住的重要一点是,连续稀释后[GSH]为5、2.5、1.25、0.625、0.3125、0.1563、0.0781和0 µM,而[TGSH]为10、5、2.5、1.25、0.625、0.3125, 0.1563和0 µM。在相同的系列稀释后。这是因为GSSG / GSH摩尔比为:1 GSSG⟶ 2 GSH。因此,绘制标准曲线时,TGSH的x轴值需要是GSH的x轴值的两倍。

3.我可以将Triton X-100用作Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比分析试剂盒*绿色荧光*(货号10056)的裂解缓冲液吗?我可以使用X缓冲液裂解/制备样品吗?

答:您可以使用Triton X-100,但是它可能会导致测定读数的背景增加。有关特定缓冲液的其他问题,请通过helen@aatbio.com与我们的技术支持联系。

4.在使用Amplite 荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率分析试剂盒*绿色荧光*(货号10056)之前,我需要对样品进行脱蛋白处理吗?

答;如果发现不一致或意外的结果,则一种解决方案可能是在使用测定之前对样品进行脱蛋白处理。

5.为什么我的GSH浓度大于总GSH浓度?为什么我计算出的GSH / TGSH比值大于1?

答:这种结果有多种可能的原因。例如,[GSH]和[TGSH]之间可能没有统计学上的显着差异,表明样品中的GSSG很少甚至没有。在这种情况下,由于实验偏差,GSH浓度可能会大大高于GSH总浓度。另一种可能的解释是由于测定活性降低,可能导致测定结果不一致。该测定成分在室温下以及暴露于光线下均不稳定,应在制备后的两个小时内使用。对于具有更高稳定性的试剂盒,我们建议使用Amplite 快速荧光谷胱甘肽GSH / GSSG比率检测试剂盒*绿色荧光*

6.为什么总GSH标准溶液浓度等于GSSG标准溶液浓度的两倍?为什么[GSSG]等于([总GSH]-[GSH])除以2?

答:还原后,1摩尔GSSG变为2摩尔GSH。因此,如果初始GSSG浓度为1μM,则还原后的GSH浓度为2μM。相反,要从[总GSH]中确定[GSSG],则必须除以2以说明GSSG与GSH的摩尔比:1 GSSG⟶ 2 GSH。

7.Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒 绿色荧光(Cat#10060)中提供的探针仅与还原的GSH反应,而与GSSG不反应。为什么还需要准备GSSG标准曲线?

答:在氧化应激期间,GSSG会在细胞中积累,从而增加GSSG与GSH的比例。由于Thiolite Green 520WS仅与GSH反应,因此必须首先将累积的GSSG酶转化为GSH。因此,要测量GSH和总GSH,必须创建GSH和GSSG标准曲线。减少的GSH使用GSH标准测量,总GSH(GSH和GSSG)使用GSSG标准测量。要计算GSSG,请从总GSH中减去GSH量,然后使用此值确定最终的GSH / GSSG比。