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如何荧光标记外泌体?

外泌体——包含了复杂RNA和蛋白质的小泡膜(直径在40nm-100nm)

外泌体的发现及命名:1983年在绵羊网织红细胞中首次发现外泌体,1987年被命名为”exosome”。

外泌体的组成:外泌体主要含有融合蛋白和转运蛋白、热休克蛋白(HSP 70)、CD类蛋白以及磷脂酶和其他脂质相关蛋白,但是不同来源的外泌体的组成有差异。

在所有细胞中,均可以分泌外泌体,并且它还存在于体液,包括血液、尿液、脑脊液、唾液、乳汁中。


外泌体提取方式:

1.超速离心法:目前最常用的提取方法。此种方法得到的外泌体量多,但是纯度不足。

2.过滤离心法:这种操作简便,不影响外泌体的生物活性 ,但纯度不足。

3.密度梯度离心法:前期准备工作繁杂,耗时,量少,但纯度高。

4.免疫磁珠法:特异性高、操作简单保证外泌体形态完整,但会影响外泌体生物活性。

5.PS亲合法:获得的外泌体形态完整,纯度最高且不影响外泌体生物活性。

6.色谱法:分离的外泌体在TEM下大小均匀,但设备特殊。

外泌体鉴定方式:主要有四种方法:透射电子显微镜(TEM)、Nanosight、Western Blot和流式细胞术。

 

您可以使用以下任何一种亲脂性荧光染料标记膜和其他疏水结构,例如外泌体:

DiO(绿色荧光),DiI(橙色荧光),DiD(红色荧光)和DiR(深红色荧光)的独特荧光颜色为多色成像和流式细胞仪分析提供了方便的工具。


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