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PSA(Power Styramide 信号放大)

Power Styramide 信号放大 (PSA ) 是一种新型酶促放大方法,用于检测细胞和组织中的低丰度目标。通过将 iFluor 染料的卓越亮度和光稳定性与聚 HRP 介导的苯乙烯酰胺扩增相结合,PSA 成像产生明亮的荧光信号,其精确度和灵敏度比传统免疫组织化学、免疫细胞化学和原位杂交高出 100 倍以上。

与酪酰胺信号放大 (TSA) 类似,PSA 成像使用分析物依赖性报告酶、辣根过氧化物酶 (HRP) 来催化标记的 Styramide 底物的共价沉积和原位结合到目标蛋白质或核酸序列上。在过氧化氢 (H2O2) 存在下,HRP 将标记的 Styramide 底物转化为高反应性、短寿命的 Styramide 自由基,这些自由基迅速与酶位点上和附近的酪氨酸残基结合。 Styramide 自由基比 tyramide 自由基具有更高的反应性,使 PSA 成像比传统 TSA 标记更快、更稳定、更灵敏。由于添加的标记 Styramide 沉积在 HRP 目标位点附近,因此与扩散相关的分辨率损失最小。 PSA 成像技术可以很容易地添加到任何允许将 HRP 集成到其协议中的应用程序中。此类应用包括 IHC、ICC、IF、原位杂交和 ELISA。

图1. PSA 检测方法应用于目标抗原免疫标记的示意图

 

PSA 成像的优势

由每个 HRP 标记的多个 Styramide 底物的快速催化和共价沉积产生的 Power Styramide 信号放大转化为许多实际好处,包括简单性、增强的灵敏度和特异性以及与其他技术的兼容性。 Styramide 自由基的更高反应性使得 Styramide 在 HRP 目标相互作用位点的标记更加稳健和迅速,从而产生比 TSA 更强的信号强度和更好的空间分辨率。

 

PSA 的主要特点:

  1. 低丰度目标的超灵敏检测,比 IHC、ICC 和 IF 方法高 100 倍
  2. 高荧光强度,比酪胺高 10 至 50 倍
  3. 与其他荧光标记物、染色技术和 PSA 成像试剂盒兼容,用于多重分析
  4. PSA 自由基具有更高的反应性,可获得更快的结果和等效的灵敏度和分辨率
  5. 节省宝贵的抗体,PSA 标记实现了同等水平的灵敏度,同时降低了一抗
  6. PSA 成像试剂盒易于使用,试剂可进行 100 次测试

 

iFluor™ 594 Styramide™
iFluor 594 Styramide
(货号45035)
AF594 tyramide reagent
AF594 酪胺
(Cat No. 11082)

图2. 使用 PSA 和 TSA 扩增方法对甲醛固定、石蜡包埋的荧光 IHC进行染色

 

卓越的检测灵敏度

在免疫染色应用中,PSA 成像的灵敏度增强并且可以增加一抗稀释度而不牺牲测定灵敏度。此外,增加一抗稀释度可减少非特异性背景信号,并克服因固定程序不当或目标表达水平低而导致的免疫标记不足。

图3. Power Styramide信号放大 (PSA™) 试剂盒的灵敏度检查结果图

 

PSA的多路复用

PSA 系统旨在与其他荧光标记物、细胞和组织染色技术以及其他 PSA 成像试剂盒兼容,从而实现多个目标的同时可视化。与 TSA 和荧光二抗相比,PSA 的检测阈值较低,还允许使用在同一宿主物种中产生的一抗检测两个靶标,但信号之间没有明显的串扰。

PSA 成像兼容试剂:

  1. 荧光标记物和复染剂(例如 DAPI、Hoechst)
  2. 荧光蛋白(例如,GFP、YFP、RFP)
  3. 其他 Styramide 试剂
  4. 其他 PSA 成像试剂盒
  5. 酪胺试剂和酪胺成像试剂盒
iFluor™ 488 PSA™ Imaging Kit GAR
iFluor 488 PSA试剂盒
(Cat No. 45205)
iFluor™ 555 PSA™ Imaging Kit GAM
iFluor 555 PSA试剂盒
(Cat No. 45270)
DAPI
DAPI
(Cat No. 17507)
Merged
组合
 

图4. 使用 iFluor PSA 成像试剂盒对甲醛固定、石蜡包埋的人肺腺癌进行连续免疫染色。

 

PSA 成像工作流程

PSA 成像利用辣根过氧化物酶 (HRP) 催化活性在原位生成目标蛋白质或核酸序列的高密度标记。与 IHC、ICC 和 ISH 程序的传统工作流程一样,PSA 成像易于执行,包括几个简单的过程。在此工作流程中,荧光二抗被聚 HRP 二抗取代,唯一的额外步骤是与标记的 Styramide 一起孵育。

  1. 固定、透化和封闭细胞或组织样本。用未标记的一抗、生物素化一抗或生物素化核酸探针孵育样品。
  2. 添加 HRP-二抗或 HRP-链霉亲和素偶联物。
  3. 添加 iFluor 染料 Styramide 工作溶液,允许 HRP 催化 Styramide 沉积。
  4. 检测样品信号

图5. Power Styramide 信号放大 (PSA ) 的工作流程

 

相关产品

表1. PSA产品信息

Styramide 分子量 Ex (nm) Em (nm) 滤波片 ε Φ
iFluor 350 Styramide 931.13 345 442 DAPI 20,000 0.95
iFluor 488 Styramide 1037.99 491 514 FITC 75,000 0.9
iFluor 546 Styramide 1326.69 541 557 Cy3/TRITC 100,000 0.67
iFluor 555 Styramide 1023.15 552 567 Cy3/TRITC 100,000 0.64
iFluor 568 Styramide 1243.60 568 587 Cy3/TRITC 100,000 0.57
iFluor 594 Styramide 1341.71 587 603 Cy3/TRITC 180,000 0.53
iFluor 647 Styramide 1231.63 654 669 Cy5 250,000 0.25
iFluor 680 Styramide 1151.28 683 700 Cy5 220,000 0.23
iFluor 700 Styramide 1158.44 690 713 Cy7 220,000 0.23
iFluor 750 Styramide 1257.67 759 777 Cy7 275,000 0.12
iFluor 790 Styramide 1525.02 786 811 Cy7 250,000 0.13

 

表2. PSA试剂盒

iFluor PSA成像试剂盒 抗体 Ex (nm) Ex (nm) 滤波片 规格 货号
iFluor 350 PSA 成像试剂盒 羊抗鼠 IgG-HRP 344 448 DAPI 100 tests 45250
iFluor 350 PSA 成像试剂盒 羊抗兔 IgG-HRP 344 448 DAPI 100 tests 45200
iFluor 488 PSA 成像试剂盒 羊抗鼠 IgG-HRP 491 514 FITC 100 tests 45260
iFluor 488 PSA 成像试剂盒 羊抗兔 IgG-HRP 491 514 FITC 100 tests 45205
iFluor 555 PSA 成像试剂盒 羊抗鼠 IgG-HRP 552 567 Cy3/TRITC 100 tests 45270
iFluor 555 PSA 成像试剂盒 羊抗兔 IgG-HRP 552 567 Cy3/TRITC 100 tests 45220
iFluor 594 PSA 成像试剂盒 羊抗鼠 IgG-HRP 592 619 Cy3/TRITC 100 tests 45280
iFluor 594 PSA 成像试剂盒 羊抗兔 IgG-HRP 592 619 Cy3/TRITC 100 tests 45230
iFluor 647 PSA 成像试剂盒 羊抗鼠 IgG-HRP 649 665 Cy5 100 tests 45240
iFluor 647 PSA 成像试剂盒 羊抗兔 IgG-HRP 649 665 Cy5 100 tests 45290

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