Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 绿色荧光

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产品优势

通过定量AChE催化乙酰硫代胆碱水解产生的硫代胆碱来检测酶活性

适用范围

用于检测乙酰胆碱酯酶活性

产品介绍

乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，简称AChE）是一种通过水解作用降解神经递质乙酰胆碱的关键酶，其催化反应生成胆碱和乙酰基团。该酶主要分布于神经肌肉接头和中枢神经系统的胆碱能突触中，通过快速终止突触传递发挥重要生理功能。

AChE具有极高的催化效率——单个酶分子每秒可降解约5000个乙酰胆碱分子。乙酰胆碱酯酶同时存在于红细胞膜表面，作为Yt血型抗原的组成成分。虽然AChE存在多种分子形式（其寡聚化结构和细胞表面附着方式各异），但各亚型均保持相似的催化特性。

Amplite®荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒采用卓越的Thiolite Green™荧光探针，通过定量AChE催化乙酰硫代胆碱水解产生的硫代胆碱来检测酶活性。Thiolite Green™的荧光强度与硫代胆碱的生成量（即AChE活性）成正比

适用仪器

96孔板测定示例

概述

1.准备AChE反应混合物（50μL）

2.加入AChE标准品或AChE测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10-30分钟

4.监测荧光强度，激发光 / 发射光（Ex/Em）=490/525 nm

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

储备液的制备

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用的小份，制备后于 - 20°C 储存，避免反复冻融。

Thiolite™ Green 储备液（200X）：

向 Thiolite™ Green（组分 A）的试剂瓶中加入 50 µL 二甲基亚砜（DMSO，组分 E），配制成 200X Thiolite™ Green 储备液。

乙酰硫代胆碱储备液（500X）：

向乙酰硫代胆碱（组分 C）的试剂瓶中加入 0.6 mL 双蒸水（ddH₂O）。

乙酰胆碱酯酶标准品储备液：

向乙酰胆碱酯酶标准品（组分 D）的试剂瓶中加入 100 µL 含 0.1% 牛血清白蛋白（BSA）的双蒸水，配制成 50 U/mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液。

标准溶液的制备

乙酰胆碱酯酶标准品

推荐使用系列稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11402

1.取 20 µL 50 U/mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液，加入 980 µL 检测缓冲液（组分 C）中，配制成 1000 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液。

2.取 1000 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液进行 1:10 稀释，得到 100 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液（AS7）。

3.再进行 1:3 系列稀释，得到其余系列稀释的乙酰胆碱酯酶标准品（AS6 - AS1）。

注：稀释后的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定，应在 4 小时内使用。

工作液的制备

1.向 5 mL 检测缓冲液（组分 B）中加入 10 μL 乙酰硫代胆碱储备液（500X）和 25 μL Thiolite™ Green 储备液（200X），配制成总体积为 5.03 mL 的乙酰胆碱酯酶（AChE）工作液。

注：AChE 工作液不稳定，需在 30 分钟内使用，且应避光保存。。

关于细胞样品制备的指导说明，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

表 1. 黑色固体 96 孔微孔板中乙酰胆碱酯酶标准品和待测样品的布局
AS = 乙酰胆碱酯酶标准品（AS1-AS7，0.14 至 100 mU/mL）；BL = 空白对照；TS = 待测样品。

表 2. 每孔的试剂组成