Amplite 荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒 红色荧光

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产品优势

通过定量AChE催化乙酰硫代胆碱水解产生的硫代胆碱来检测酶活性

适用范围

用于检测乙酰胆碱酯酶活性

产品介绍

乙酰胆碱酯酶（Acetylcholinesterase，简称AChE）是一种通过水解作用降解神经递质乙酰胆碱的关键酶，其催化反应生成胆碱和乙酰基团。该酶主要分布于神经肌肉接头和中枢神经系统的胆碱能突触中，通过快速终止突触传递发挥重要生理功能。

AChE具有极高的催化效率——单个酶分子每秒可降解约5000个乙酰胆碱分子。乙酰胆碱酯酶同时存在于红细胞膜表面，作为Yt血型抗原的组成成分。虽然AChE存在多种分子形式（其寡聚化结构和细胞表面附着方式各异），但各亚型均保持相似的催化特性。

Amplite®荧光法乙酰胆碱酯酶检测试剂盒采用卓越的Thiolite Green™荧光探针，通过定量AChE催化乙酰硫代胆碱水解产生的硫代胆碱来检测酶活性。Thiolite Green™的荧光强度与硫代胆碱的生成量（即AChE活性）成正比

适用仪器

96孔板测定示例

概述

1.准备AChE反应混合物（50μL）

2.加入AChE标准品或AChE测试样品（50μL）

3.在室温下孵育10-30分钟

4.监测荧光强度，激发光 / 发射光（Ex/Em）=540/590 nm（截止波长 = 570 nm）

注意：在开始实验之前，在室温下解冻所有试剂盒组分。

储备液的制备

除非另有说明，所有未使用的储备液应分装成单次使用的小份，制备后于 - 20°C 储存，避免反复冻融。

Amplite™ Red 储备液（250X）：

向 Amplite™ Red（组分 A）的试剂瓶中加入 40 µL 二甲基亚砜（DMSO，组分 G），配制成 250X Amplite™ Red 储备液。

乙酰胆碱酯酶标准溶液（50 单位 /mL）：

向乙酰胆碱酯酶标准品（组分 D）的试剂瓶中加入 100 µL 检测缓冲液（组分 E），配制成 50 单位 /mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液。

乙酰胆碱储备液（1000X）：

向乙酰胆碱（组分 C）的试剂瓶中加入 100 µL 检测缓冲液（组分 E），配制成 1000X 乙酰胆碱储备液。

标准溶液的制备

乙酰胆碱酯酶标准品

推荐使用系列稀释计算器：https://www.aatbio.com/tools/serial-dilution/11402

1.取 20 µL 50 单位 /mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液，加入 980 µL 稀释缓冲液（组分 F）中，配制成 1000 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准溶液。

2.取 1000 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准品，用稀释缓冲液（组分 F）进行 1:10 稀释，得到 100 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准品（AS7）。

3.取 100 mU/mL 的乙酰胆碱酯酶标准品（AS7），用稀释缓冲液（组分 F）进行 1:3 系列稀释，得到系列稀释的乙酰胆碱酯酶标准品（AS6-AS1）。

注：稀释后的乙酰胆碱酯酶标准溶液不稳定，应在 4 小时内使用。

工作液的制备

1.向乙酰胆碱酯酶探针（组分 B）的试剂瓶中加入 5 mL 检测缓冲液（组分 E），充分混匀。

2.向上述乙酰胆碱酯酶探针混合液中加入 5 μL 1000X 乙酰胆碱储备液，充分混匀。

3.向该乙酰胆碱酯酶探针混合液中加入 20 μL 250X Amplite™ Red 储备液，配制成乙酰胆碱酯酶（AChE）工作液。

注：此乙酰胆碱酯酶（AChE）工作液应立即使用并避光保存。储存时间过长会导致检测背景升高。

关于细胞样品制备的指导说明，请访问：https://www.aatbio.com/resources/guides/cell-sample-preparation.html

表 1. 黑色固体 96 孔微孔板中乙酰胆碱酯酶标准品和待测样品的布局
AS = 乙酰胆碱酯酶标准品（AS1-AS7，0.14 至 100 mU/mL）；BL = 空白对照；TS = 待测样品。

表 2. 每孔的试剂组成