ATTO 532 NHS 酯在PNA标记中的应用
|
在蛋白质与核酸的精准组装与荧光成像研究中，ATTO 532 NHS 酯 作为一种高性能荧光标记试剂，展现出卓越的光物理特性与标记效率。本文将结合Gholami与Hanley的研究成果，重点介绍其在肽核酸（PNA）标记中的应用，展示其在构建可控蛋白质组装体系中的关键作用。
ATTO 532光谱特性 Ex：531nm；Em：552nm 光稳定性高，亮度强，适用于FRET、单分子成像及活细胞追踪
ATTO 532NHS酯标记PNA的流程 在Gholami等人的研究中，ATTO 532 NHS 酯被用于标记带有C末端赖氨酸的BG-PNA探针。具体步骤如下： ①BG-PNA合成：通过马来酰亚胺-BG与半胱氨酸修饰的PNA（如PNA2: Cys-O-CAATGA-Lys）在pH 7.2的PBS中反应，形成稳定的硫醚键。
②ATTO 532标记：将约10倍当量的ATTO 532 NHS 酯加入BG-PNA溶液中，室温避光反应1小时。 ③纯化与验证：通过RP-HPLC和MALDI-TOF MS确认标记产物。质谱结果显示目标产物分子量为 3147 Da（理论值：3148 Da），表明标记效率极高。
实验结果与验证 1. RP-HPLC图谱 ATTO 532标记的BG-PNA在23.7分钟处出现单一峰，表明产物纯度良好。 2. SNPA蛋白偶联 ①将BG-PNA-Atto532与SNAP蛋白在37°C下孵育2小时，成功形成SNAP-PNA-Atto532偶联物。 ②SDS-PAGE显示清晰的23 kDa条带，SEC-HPLC进一步确认偶联物结构一致。
DNA模板引导的蛋白质组装与FRET检测 研究中利用DNA模板（如DNA2）将SNAP-PNA-Atto488与SNAP-PNA-Atto532组装成异源二聚体，并观察到高效的异源FRET： ①FRET效率高达93% ②供体-受体间距约4.1 nm，与理论值高度吻合 ③证明了ATTO 532作为受体在能量转移中的优异性能
|
