从流式到三维成像：PE和APC在干细胞发育研究中的“黄金搭档”

从血管内皮到造血干细胞：PE与APC如何亮点发育生物学中的关键事件？

在哺乳动物胚胎发育过程中，造血干细胞（HSC）在主动脉-性腺-中肾（AGM）区从血源性内皮细胞中经“内皮-造血转化”诞生。这一过程不仅是发育生物学的核心问题，也直接关系到先天性免疫缺陷、骨髓增生异常综合征和白血病的发生机制。

Gao et al. (2013) 在《Journal of Experimental Medicine》上发表的研究，首次揭示了一个名为 +9.5 kb 的Gata2顺式调控元件对AGM区HSC的生成至关重要。而在这项研究的多个关键实验中，APC和PE荧光标记抗体发挥了不可替代的作用。

流式细胞术：精准划分内皮与造血细胞群

研究人员为了分析+9.5元件对AGM中不同细胞类型的影响，需要从培养的AGM外植体中区分内皮细胞与造血细胞。他们采用了：

①APC-CD31（CD31标记所有内皮细胞及造血簇细胞）

②PE-c-Kit（c-Kit标记造血细胞，不标记内皮细胞）

过双色流式细胞术，成功将细胞分为：

①内皮细胞群：CD31⁺ c‑Kit⁻（或低表达）

②造血细胞群：CD31⁺ c‑Kit⁺

结果显示：在+9.5⁻/⁻突变体中，内皮细胞数量减少1.8倍，造血细胞数量骤减9.5倍——PE-c-Kit的高灵敏度信号直接揭示了HSC生成的严重缺陷。

全胚胎三维成像：PE/APC助力“看见”HSC诞生的瞬间

在更直观的层面上，研究者对E10.5小鼠胚胎进行了全胚免疫荧光染色与共聚焦三维重建。他们使用：

①APC-CD31（品红色，表征血管结构）

②PE-c-Kit（绿色，标记新生造血簇）

成像像结果令人震撼：

在野生型胚胎背主动脉内，可见大量CD31⁺c‑Kit⁺造血簇（绿色亮点聚集）。而在+9.5⁻/⁻突变体中，c‑Kit阳性细胞几乎完全消失（<10个 vs. 460±21个）。

E-c-Kit的高亮信号与APC-CD31的血管背景形成强烈对比，使得研究者能够在完整胚胎中直接量化HSC生成事件——这是其他方法难以实现的。

文献中还有3D成像视频可供参考

为什么选择PE和APC

在Gao et al.的研究中，PE与APC的组合实现了：

①流式中高效分辨内皮与造血亚群；

②全胚成像中清晰区分血管结构与新生HSC簇；

③数据可重复、信号稳定，支持定量分析（如c‑Kit⁺细胞计数）。

文献支持：Gata2 cis-element is required for hematopoietic stem cell generation in the mammalian embryo