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溶酶体(Lysosomes)

 

溶酶体是细胞消化细胞质中不需要的材料和细胞碎片的“废物处理”系统。它们是膜封闭的细胞器,内部呈酸性(pH 约为 4.8),大小从 0.1 到 1.2 µm 不等。溶酶体包含各种水解酶,负责消化生物聚合物,如蛋白质、肽、核酸、碳水化合物和脂质。溶酶体水解酶的合成受核基因控制,由于溶酶体酶功能缺陷,这些基因的突变会导致一系列遗传性代谢紊乱。这些代谢紊乱统称为溶酶体贮积病。溶酶体水解酶的缺陷导致大分子或单体化合物的积累,导致异常信号通路,最终导致致病性疾病。除了分解聚合物外,溶酶体还可以与其他细胞器融合,让溶酶体水解酶消化细胞器的内容物并清除受损的结构,这种机制称为自噬。

 

溶酶体标记染料和试剂盒

LysoBrite 染料是一系列可渗透细胞的荧光染料,用于对溶酶体形态和定位进行成像,并研究活细胞中溶酶体的生物合成和发病机制。 在纳摩尔浓度下,LysoBrite 染料通过溶酶体 pH 梯度选择性地靶向并在溶酶体和其他酸性细胞器中积累。 进入溶酶体后,LysoBrite 染料的 pH 敏感荧光增强。 可以使用荧光成像、高内涵成像、微孔板荧光测定法或流式细胞术检测所得信号。 LysoBrite Orange、LysoBrite Red、LysoBrite Deep Red 和 LysoBrite NIR 染料具有极高的光稳定性和出色的细胞内保留,使其可用于各种研究,包括细胞粘附、趋化性、多药耐药性、细胞活力、细胞凋亡和细胞毒性。

用于活细胞溶酶体成像的 LysoBrite 染料

LysoBrite 染料的光谱特性范围从蓝色到近红外,以适应与其他荧光探针的多重检测,或者如果使用可固定染料 LysoBrite Red DND-99(货号22647),则在固定后用于共定位研究。 LysoBrite 染料是此处单独提供的 Cell Navigator 溶酶体染色试剂盒的主要成分。

LysoBrite 染料的特点:

  1. 1.通过溶酶体 pH 梯度选择性地积聚在溶酶体和其他酸性细胞器中
    2.pH 敏感荧光可用于更特异的溶酶体染色
    3.光稳定性强
    4.最小的细胞毒性
    5.无需水洗即可成像
    6.多种波长选项,可与其他荧光探针进行多重分析
    7.适用于增殖和非增殖细胞,以及悬浮细胞和贴壁细胞

图1. 在 Costar 黑色/透明底 96 孔微孔板中用我们的 LysoBrite Green(货号 22643)和 ThermoFisher 的 LysoTracker® Green DND-26 染色的 HeLa 细胞图像对比图。 样品连续照射 120 秒,并使用 Keyence 荧光显微镜比较曝光前后的信号。

 

表1. 用于标记活细胞中溶酶体的LysoBrite 染料。

  LysoBrite 蓝色 LysoBrite 绿色 LysoBrite 橙色 LysoBrite 红色DND-99 LysoBrite 红色 LysoBrite 深红色 LysoBrite NIR
应用 活细胞中溶酶体的荧光成像
目标 通过溶酶体pH梯度选择性地积累和标记溶酶体
Ex / Em(纳米) 432/479 500/509 542/564 573/592 575/595 595/618 634/649
滤波片组 DAPI FITC TRITC TRITC TRITC Texas Red Cy5
活细胞
固定细胞 没有
可固定
多路复用
方法 荧光成像
规格 500Tests 500Tests 500Tests 500Tests 500Tests 500Tests 500Tests
货号 22642 22643 22644 22647 22645 22646 22641

 

CytoFix Red 可固定溶酶体染色剂

即使在固定过程中失去 pH 梯度后,CytoFix Red 溶酶体染色剂增强的细胞保留能力仍能保留其溶酶体局部荧光。 这种染料产生的荧光信号在溶酶体中保留至少 1 周,使其非常适合长期溶酶体跟踪。 CytoFix Red 可与 GFP 表达的细胞、其他荧光偶联物或其他细胞器染料一起用于多色分析。 它可用于悬浮细胞和贴壁细胞,并可轻松适应各种荧光平台。

CytoFix Red 的特点:

  1. 1.溶酶体染色效率高
    2.固定后长期保留(1 周或更长时间)
    3.以最少的时间进行标记协议

图2. HeLa 细胞在 96 孔黑色透明底板中用 CytoFix LysoRed 染色的荧光图像。 在室温下用 4% 甲醛溶液固定 20 分钟之前(左)和之后(右)获得图像。 使用带有 Cy3/TRITC 滤光片的荧光显微镜对细胞进行成像。

表2. CytoFix Red 固定溶酶体染色

产品名称 样品类型 可固定 Ex (nm) Em (nm) 滤波片组 规格 货号
CytoFix 溶酶体红色探针 Live Cells Yes 540 590 Cy3/TRITC 500 Tests 23210

 

自噬 - 溶酶体降解途径

自噬是一种天然的、受调控的溶酶体降解途径,对细胞活力、发育和体内平衡至关重要。它是细胞的破坏性机制,可降解和回收不必要或功能失调的细胞成分。 它通过将靶向细胞质材料隔离到称为自噬体的双膜结合细胞器中来实现这一点。 这些自噬体随后与溶酶体细胞器融合,使其内容物被溶酶体酶消化和回收。 自噬作为一种适应性机制来保护生物体免受各种疾病的侵害。 为了研究自噬在细胞稳态中的作用,已经开发了成像工具和检测方法来检测自噬功能对细胞压力、微生物感染和疾病的反应。 Cell Meter 自噬荧光成像试剂盒利用我们专有的Autophagy Super Blue 探针,选择性地靶向和分析自噬活性。

Control
对照
(DMEM培养基)
Autophagy Treatment
自噬
(1X HBSS 缓冲液,含 5% 血清)

图3. Autophagy Green标记的囊泡是由 HeLa 细胞诱导的。 HeLa 细胞在常规 DMEM 培养基(对照)或含 5% 血清的 1X HBSS 缓冲液(自噬处理)中孵育 16 小时。 对照细胞和饥饿细胞均与 Autophagy Green 工作溶液在 37 °C、5% CO2 培养箱中孵育 20 分钟,然后用洗涤缓冲液洗涤 3 次。 在带有 FITC 通道(绿色)的荧光显微镜下立即对细胞进行成像。 细胞核用 Hoechst 33342(货号 17530)染色。

表3. 用于检测自噬活性的 Cell Meter 检测试剂盒

产品名称 样品类型 Ex (nm) Em (nm) 滤波片组 规格 货号
Cell Meter 细胞自噬检测荧光成像试剂盒 活细胞 360 445 DAPI 200 Tests 23001
Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 蓝色荧光 活细胞 360 445 DAPI 200 Tests 23000
Cell Meter 细胞自噬检测试剂盒 绿色荧光 活细胞 485 525 FITC 200 Tests 23002
Cell Meter 线粒体自噬荧光成像试剂盒*红色荧光* 活细胞 540 590 Cy3/TRITC 100 Tests 22998

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