mFluor、Tide Fluor、TF\TQ及抗体标记试剂盒篇

mFluor、trFluor、Tide Fluor、Tide Quencher(淬灭剂)以及上个月讲的iFluor系列和经典荧光染料均是美国AAT Bioquest研发生产的荧光染料。而由这几种染料合成的其他荧光探针、试剂盒，更是占了百萤出售的所有产品中的60%。而三种抗体标记试剂盒也是由它们作为标签形成的。（ReadiLink系列、ReadiLink xtra 系列以及Buccutite系列）。

一、mFluor系列染料

mFluor 染料是一系列涵盖了UV至近红外（NIR）光谱的荧光染料。 它具有出色的水溶性和很大的斯托克斯位移，其亲水性可大程度地减少有机溶剂的使用。 该染料是专门开发用于流式细胞仪的产品，它广泛用于标记抗体蛋白和其他生物分子。 mFluor 染料的大吸光度旨在通过流式细胞仪通常配备的主要激光线之一进行佳激发，例如350 nm，405 nm，488 nm，532 nm，561-568 nm或633-647 nm激光线。mFluor系列染料主要分为两类：1.mFluor反应性染料；2.mFluor缀合物染料。

1.mFluor反应性染料

mFluor 反应性染料可以被共价标记到生物分子上，而不会自我淬灭，从而产生强烈明亮的荧光缀合物。 mFluor 反应性染料形式包括用于标记抗体和蛋白质的胺反应性琥珀酰亚胺酯（SE）和硫醇反应性马来酰亚胺。 mFluor 染料也能以酸的形式用于通过碳二亚胺共轭化学（EDAC）标记蛋白质，肽，胺修饰的寡核苷酸和其他含胺的生物分子。

表1：mFluor反应性染料产品参数

2.mFluor缀合物染料

mFluor 标记的缀合物染料，可用于广泛的应用。 目前有用于细胞凋亡检测的Annexin V mFluor 缀合物染料和用于信号放大的mFluor 链霉亲和素偶联物染料。

2.1 Annexin V mFluor 缀合物染料

Annexin V mFluor 缀合物染料提供了一种快速可靠的方法来检测细胞表面的磷脂酰丝氨酸（PS）的易位进一步检测细胞凋亡。 Annexin V mFluor 缀合物染料的优异亮度和光稳定性可用于活细胞成像，免疫荧光和流式细胞术，并可与其他染料（如核酸染料）结合使用，以准确评估活体，凋亡，神经胶质和神经胶质的混合种群、死细胞等。

表2：Annexin V mFluor 缀合物染料产品参数 

ε:摩尔消光系数在其大吸收波长（单位= cm^-1M^-1）。

Φ:水性缓冲液（pH 7.2）中的荧光量子产率。

2.2 mFluor 链霉亲和素偶联物染料

荧光标记的mFluor 链霉亲和素偶联物已广泛用于荧光成像中，以检测生物素化的抗体，配体和DNA探针，用于原位杂交技术，免疫组化，多色流式细胞术和其他需要高灵敏度的应用。 mFluor 链霉亲和素偶联物表现出小的自淬灭，产生异常明亮和光稳定的荧光信号，优于AlexaFluor®和其他光谱相似的偶联物。 

表3.mFluor 链霉亲和素偶联物染料参数

二、trFluor系列探针

trFluor 探针是一种高灵敏度的专用于时间分辨荧光法（TRF）检测的探针。 与传统的荧光团（例如Alexa FluorR或花菁染料）相比，这些trFluor 探针具有较大的斯托克斯位移和极长的发射半衰期。 与其他TRF化合物相比，trFluor 染料具有相对较高的稳定性，较高的发射（Em）以及与生物分子连接的能力。 此外，当与生物聚合物（例如抗体）偶联时，我们的trFluor Eu探针对荧光淬灭不敏感。trFluor系列染料分为两种：trFluor Eu TRF 标记探针和trFluor Tb TRF 标记探针。

特点：

1. 1. 无需添加氟化物。
   2. 无需额外的试验方案。
   3. 有多种反应形式。
   4. 与生物分子结合更容易。
   5. 比其他TRF染料高得多的缀合产率。
   6. 普通光源在〜350 nm处大程度地激发。
   7. trFluor Eu染料经过优化，可与APC，iFluor 647，TF5，Cy5R，DyLight 650和Alexa FluorR 647配对。
   8. trFluor Tb染料经过优化，可与FITC，iFluor 488，TF2，DyLight 488和Alexa FluorR 488配对。

工作原理：

供体和受体两种荧光染料，溶液中无    FRET	染料接触后，从受体染料发出荧光

表4.trFluor产品参数 

三、Tide Fluor系列染料和Tide Quencher淬灭剂

Tide Fluor系列探针是专门针对FRET寡核苷酸的制备而研发的。Tide Fluor 染料（如TF1，TF2，TF3，TF4，TF5，TF6，TF7和TF8）具有比经典的荧光团（如荧光素，罗丹明和花青素）更强的荧光和更高的光稳定性。Tide Quencher是一种可以与Tide Fluor或经典荧光染料配合使用的受体染料（例如TQ1，TQ2，TQ3，TQ4，TQ5，TQ6和TQ7）。Tide Quencher™受体染料与市场上其他同类产品相比，具有更高的成本效益，可满足您所需的生物学应用，甚至具有可比甚至更好的性能。

上图：Tide Fluor系列染料的激发波长；下图：Tide Fluor系列染料的发射波长。

表5：Tide Fluor系列产品参数及特点

表6：Tide Quencher产品参数

四、抗体标记试剂盒

百萤出售的抗体标记试剂盒根据标记的基团、标记的蛋白含量、标记的标签、可标记的应用等因素分为三种试剂盒：1.ReadiLink 试剂盒；2.ReadiLink xtra 试剂盒；3.Buccutite 试剂盒。

表7：三种试剂盒参数

1.ReadiLink试剂盒

ReadiLink试剂盒全称：ReadiLink快速抗体标记试剂盒（ReadiLink Rapid Antibody Labeling Kits）。它提供了一种快速便捷的方法，可以使用我们的iFluor 染料，mFluor 染料或其他标记物来标记微量的抗体。ReadiLink 试剂盒的独特化学性质使研究人员无需纯化步骤即可轻松标记和回收100％的抗体。

特点：

1. 1. 标记单克隆抗体，多克隆抗体或其他蛋白质
   2. 快速简单的两步标记方案，无需化学或结合经验
   3. 可用于标记100 µg抗体（两次分别的50 µg抗体标记反应）
   4. 100％抗体回收，无需纯化产品
   5. 共轭物可在1小时内投入使用，动手时间短约为10分钟
   6. 可选择iFluor™染料，mFluor™染料，AlexaFluor®等效AF染料，FITC，7.Cy3，Cy5，Cy7，BSA，KLH或生物素
   7. 避免使用任何含胺的缓冲液（例如Tris或甘氨酸）
   8. 标记前必须去除稳定剂（例如BSA或明胶），对于与BSA兼容的抗体标记试剂盒，请使用ReadiLink xtra快速抗体标记试剂盒

工作原理：

• 第一步：准备抗体工作溶液；
• 第二步：将反应缓冲液倒入抗体工作溶液中;
• 第三步：将抗体溶液转移到染料标记瓶中，孵育30-60min;
• 第四步：加入Quench溶液，混合均匀，孵育10min;
• 现在便可以使用了

产品对比：

试剂盒	CD4（SK3）-缀合	染色指数
ReadiLink Kit	CD4-iFluor 488 缀合物	43
Lightning-Link® Kit	CD4-Alexa Fluor® 488 缀合物	26

 

图示.人PBMC细胞的流式细胞仪分析。用ReadiLink Rapid iFluor488抗体标记试剂盒（#：1255）或Lightning-Link®Rapid AlexaFluor®488制备的抗人CD4抗体。使用FITC通道中的ACEA NovoCyte流式细胞仪检测荧光信号。

表8：ReadiLink试剂盒参数

2.ReadiLink xtra试剂盒

具有BSA兼容性的ReadiLink xtra快速抗体标记试剂盒将一抗标记带到了全新的便利水平。ReadiLink xtra试剂盒将优化的标记方案与经过特殊配制的标记瓶组合在一起，可在常见缓冲液添加剂和蛋白稳定剂的存在下快速，可重复记微量的一抗。仅需两个简单步骤，无需进行过柱纯化，即可共价标记适用于任何基于免疫的应用的抗体。

特点：

1. 1. 与BSA和其他蛋白稳定剂兼容；
   2. 标记单克隆抗体，多克隆抗体或其他蛋白质；
   3. 标记100 µg抗体（两次分别标记50 µg抗体的反应）;
   4. 100％的抗体回收，不需要产物纯化步骤；
2. 5. 共轭物可在1小时内投入使用，动手时间短约为10分钟；
3. 6. 可选择iFluor 染料，mFluor 染料，AlexaFluor®等效AF染料，FITC，Cy3，Cy5或Cy7

表9：ReadiLink xtra试剂盒参数

3.Buccutite 试剂盒

Buccutite 交联技术提供了一种简便的方法，可以用辣根过氧化物酶（HRP），碱性磷酸酶（AP）或藻胆蛋白共价标记蛋白质和抗体。与传统的蛋白质-蛋白质结合技术（例如SMCC化学标记方法）相比，Buccutite 结合显着增强了稳定性，降低了要求。这些试剂盒可在不到两个小时的时间内对微克抗体（每个标记反应低至25 µg）进行佳标记，而无需纯化，且收率100％。使用Buccutite 标记试剂盒，可以常规制备经共价标记的结合物，这些结合物能够承受典型的免疫测定（例如ELISA，IHC和Western blot）或流式细胞仪应用中通常需要的严格洗涤技术。 

特点：

• 1. 标记25 µg至1 mg抗体；
• 2. 标签的选择包括HRP，AP，藻红蛋白（PE），别藻蓝蛋白（APC），PerCP，PE串联染料和APC串联染料；
• 3. 不到2小时的标记时间，无需纯化；
• 4. 100％抗体回收

产品对比：

试剂盒	CD4(SK3)- 缀合	染色指数
Buccutite 试剂盒	CD4-PE 缀合物	55
Lightning-Link® 试剂盒	CD4-PE 缀合物	28

 

图示.人PBMC细胞的流式细胞仪分析。用Buccutite 快速PE抗体标记试剂盒（#：1310）或Lightning-Link®PE制备的抗人CD4抗体。使用ACEA NovoCyte流式细胞仪在FITC通道中检测荧光信号。

表10：Buccutite 试剂盒参数