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锦囊:iFluor 系列染料大集合

 

AAT Bioquest的iFluor 染料是一系列高度水溶性荧光染料,用于标记生物分子,如蛋白质和抗体。该系列染料涵盖紫外 - 可见光到近红外光谱,该系列染料可以匹配任何仪器设置和多种多重检测组合。 iFluor 染料共轭物具有优异的亮度和光稳定性,优于大多数AlexaFluor®共轭物和其他光谱相似的共轭物。

图1.将HeLa细胞与(Tubulin +)或(Tubulin-)小鼠抗微管蛋白一起孵育,然后与iFluor 488山羊抗小鼠IgG缀合物(绿色,左图)或Alexa Fluor 488山羊抗小鼠IgG缀合物(绿色,右图)孵育。 细胞核分别用Hoechst 33342(蓝色)染色。

 

iFluor 染料和其共轭物的特点:

1.亮度

iFluor 共轭物比其他光谱相似的共轭物(例如AlexaFluor®染料,荧光素染料,花青染料等)表现出更强的荧光。

2.光稳定性

iFluor 共轭物比光谱相似的共轭物更具光稳定性,荧光不易消失,有更多时间可以观察、照相。

3.水溶性

iFluor 活性染料具有高度水溶性。可以在没有有机溶剂的情况下进行缀合,得到在储存期间抗沉淀的缀合物。

4.pH不敏感

iFluor 染料在广泛的pH范围内具有强大的高荧光性。

5.仪器兼容性

iFluor 染料的吸收光谱与常见激发光源的主要输出波长相匹配。

6.颜色选择

iFluor 染料有多种不同颜色可供选择,从紫色(350 nm)到红外(860 nm)。

 

iFluor染料选择指南

荧光团 Ex / Em(nm) 替代品 反应形式
硫醇 炔烃 叠氮化物
iFluor 350 344/488 香豆素•AlexaFluor®350•DyLight 350 #1020   #1060 #1080 #1070    
iFluor 405 402/425 CascadeBlue®•AlexaFluor®405•DyLight 405 #1021   #1053 #1081 #1071    
iFluor 430 433/495 AlexaFluor®430 #1052   #1054        
iFluor 450 451/502   #1026   #1057        
iFluor 488 492/516 AlexaFluor®488•DyLight 488 #1023   #1062 #1082 #1072 #1000 #999
iFluor 514 527/554 AlexaFluor®514 #1024            
iFluor 532 543/563 AlexaFluor®532 #1025   #1061        
iFluor 546 541/557 AlexaFluor®546 #1048            
iFluor 555 556/569 Cy3®•AlexaFluor®555•DyLight 550 #1028   #1063 #1083 #1073 #1093 #1092
iFluor 560 559/571   #1040            
iFluor 568 568/587 Rhodamine Red •AlexaFluor®568 #1049   #1055        
iFluor 594 587/603 Texas Red®•AlexaFluor®594•DyLight 594 #1029   #1064        
iFluor 610 609/627 AlexaFluor®610 #1038            
iFluor 633 638/652 AlexaFluor®633 #1030   #1056        
iFluor 647 654/669 Cy5®•AlexaFluor®647•DyLight 650 #1031   #1065 #1085 #1074 #1091 #1090
iFluor 660 660/677 AlexaFluor®660 #1032       #1075    
iFluor 670 669/682 Cy5®B #1033            
iFluor 680 683/700 Cy5.5®•IRDye®700•AlexaFluor®680 #1035   #1066 #1086 #1076    
iFluor 700 690/713  AlexaFluor®700 #1036   #1067 #1087 #1077    
iFluor 710 712/736   #1045       #1078    
iFluor 750 759/777 Cy7®•AlexaFluor®750•DyLight 750 #1037   #1068 #1088 #1079    
iFluor 790 786/811 IRDye®800•AlexaFluor®790•DyLight 800 #1368 #1360 #1366 #1364 #1362    
iFluor 800 801/820   #1379 #1375 #1378        
iFluor 810 812   #1389 #1385 #1388        
iFluor 820 820   #1399 #1395 #1398         
iFluor 840 836   #1403 #1401 #1402        
iFluor 860 854   #1409 #1405 #1408        
     琥珀酰亚胺酯 马来酰亚胺 酰肼 叠氮化物 炔烃
反应形式

 

iFluor 染料光谱特性(全)

iFluor 染料 Ex / Em(nm) Ext. Coeff.1 FQY2 CF at 260 nm3 CF at 280 nm4
iFluor 350 344/488 20,000 0.95 0.83 0.23
iFluor 405 402/425 37,000 0.91 0.48 0.77
iFluor 430 433/495 40,000 0.78 0.68 0.3
iFluor 450 451/502 40,000 0.82 0.45 0.27
iFluor 488 491/516 75,000 0.9 0.21 0.11
iFluor 514 527/554 80,000 0.83 0.25 0.11
iFluor 532 543/563 90,000 0.68 0.26 0.16
iFluor 546 541/557 100,000 0.67 0.25 0.15
iFluor 555 556/569 100,000 0.64 0.23 0.14
iFluor 560 559/571 130,000 0.57 0.048 0.069
iFluor 568 568/587 100,000 0.57 0.34 0.15
iFluor 594 587/603 180,000 0.53 0.05 0.04
iFluor 610 609/627 110,000 0.85 0.32 0.49
iFluor 633 638/652 250,000 0.29 0.062 0.044
iFluor 647 654/669 250,000 0.25 0.03 0.03
iFluor 660 660/677 250,000 0.26 0.07 0.08
iFluor 670 669/682 250,000 0.63 0.019 0.024
iFluor 680 683/700 220,000 0.23 0.097 0.094
iFluor 700 690/713 220,000 0.23 0.09 0.04
iFluor 710 712/736 190,000 0.14 0.12 0.07
iFluor 750 759/777 275,000 0.12 0.044 0.039
iFluor 790 786/811 275,000 0.13 0.1 0.09
iFluor 800 801/820 250,000 0.11 0.03 0.08
iFluor 810 811/822 250,000 0.05 0.09 0.15
iFluor 820 820/849 250,000 N / D 0.11 0.16
iFluor 840 836/876 200,000 0.02 0.2 0.09
iFluor 860 852/877 250,000 N / D 0.1 0.14
  1. Ext. Coeff.:在其最大吸收波长处的消光系数。消光系数的单位为cm -1 M -1
  2. FQY :在水性缓冲液(pH 7.2)中的荧光量子产率。
  3. 260 nm处的CF是用于消除染料对260 nm处的吸光度的影响的校正因子。
  4. 280 nm处的CF是用于消除染料对280 nm处的吸光度的影响的校正因子(用于肽和蛋白质标记)。
  5. 与蛋白质偶联后,荧光强度明显增加。

 

图2.用小鼠抗微管蛋白染色的HeLa细胞的图像,然后用iFluor 594山羊抗小鼠IgG(红色,Cat#16548)染色。 用鬼笔环肽-iFluor 488缀合物(绿色,Cat#23115)染色肌动蛋白丝,并用DAPI(蓝色,Cat#17507)染色细胞核。


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