百萤生物今日推荐 好用的Fluo-8钙离子指示剂

 

        百萤生物今日推荐好用的Fluo-8钙离子指示剂，Fluo-8染料已被开发用于细胞负载和钙响应，同时保持方便的Fluo-3和Fluo-4光谱波长，大激发波长为~490 nm，大发射波长为~520 nm。对于细胞培养，Fluo-8 AM只需要在室温下培养，而Fluo-3 AM和的Fluo-4 AM则需要在37℃温育。Fluo-3和Fluo-4是常用的可见光可激发的钙离子指示剂，然而，Fluo-3 AM和Fluo-4 AM在酯酶水解后仅在活细胞中发生中度荧光，并且需要苛刻的细胞负载条件来大限度的提高细胞钙反应。此外，Fluo-8 AM比Fluo-4 AM亮2倍，比Fluo-3 AM亮4倍。AAT Bioquest提供了一系列不同钙亲和力出色的Fluo-8试剂。

 

Fluo-8 AM的主要特点：

• 在室温条件下，比Fluo-3 AM和Fluo-4 AM更快，更容易装入细胞。
• 比细胞中的Fluo-3 AM和Fluo-4 AM 更亮。
• 与Fluo-4 AM的光谱几乎完全相同，十分方便。

 

图1.用Fluo-8 AM（货号 21080）和Fluo-4 AM在HEK-293细胞中测量卡巴酚剂量反应。HEK-293细胞在96孔黑壁/透明底肋片中以40000个细胞/100μl/孔接种过夜。去除生长培养基，在室温下用100μl含Fluo-8 AM或Fluo-4 AM的染色液培养细胞1小时。通过NOVOstar添加卡巴胆碱（25μL/孔）以达到终指示的浓度。在Ex / Em = 490 / 525nm下测量荧光信号。用Fluo-8测得卡巴胆碱的EC50 AM为约1.2μM。

 

图2.在Costar 96孔黑壁/透明底板中以每孔100μL每孔40,000个细胞接种U2OS细胞过夜。去除生长培养基，37℃的HHBS中将细胞用100μL的4μM的Fluo-3 AM，Fluo-4 AM和Fluo-8 AM（货号：21080）孵育1小时。用200μLHHBS洗涤细胞两次，然后使用FITC通道用荧光显微镜成像。

 

表1. Fluo-8 钙离子指示剂

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