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细胞运动过程中的GSH与NAD+

 

细胞运动是一个高度协同的复杂过程,在运动过程中,不仅需要肌动蛋白微丝/微管,还有多种细胞器、酶等共同调节。


谷胱甘肽( GSH )是由L -半胱氨酸、L -谷氨酸和甘氨酸三个氨基酸组成的三肽。它参与蛋白质二硫键的形成和维持、氨基酸跨细胞膜的运输,以及解毒。由于谷胱甘肽含有巯基,它是细胞内主要的内源性抗氧化剂,通过中和自由基和过氧化物等活性氧防止损伤。通过检测生物样品中还原型和氧化型谷胱甘肽可以客观的评估细胞、组织抗氧化能力以及解毒状态等。

我们研发了两种用于谷胱甘肽的检测试剂盒:1.Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒2.Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒

1.GSH检测

Amplite 荧光法谷胱甘肽( Glutathione )检测试剂盒是一种灵敏的、一步法荧光检测试剂盒,在100 µL的检测体积内检测到至少1皮摩尔的GSH。该方法采用一种专有的非荧光和pH依赖的谷胱甘肽探针,该探针与巯基反应后具有强荧光。该检测可采用方便的96孔或384孔微孔板进行实验,无需分离步骤,易于自动化。在Ex / Em = 490 / 520 nm处,利用荧光酶标仪可以很容易地检测到荧光信号。

图1 . GSH剂量反应检测。用Amplite 荧光谷胱甘肽试剂盒( Cat # 10055 )在96孔黑色平板上进行检测。培养10分钟可检测到低至10nM ( 1pmol / well )的GSH。

2.GSH/GSSG比率检测

我们的Amplite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒和 Amplite 快速荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒,可在 100 µL 检测体积中定量低至 1 皮摩尔的 GSH。每个试剂盒都使用专有的非荧光探针,该探针在与 GSH 反应时会发出强荧光,并且可以使用荧光酶标仪在 Ex/Em = 490/520 nm 处检测其信号。检测可以在方便的 96 孔或 384 孔微孔板进行实验,并且无需分离步骤即可轻松适应自动化。这些试剂盒的不同之处在于探针的溶解度。 Amlite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒使用的是可溶于 DMSO 的探针 Thiolite Green。 Amlite 快速荧光法谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒使用水溶性探针 Thiolite Green 520WS。

图 2. GSH 和总 (GSH + GSSG) 剂量反应的检测是用 Amlite 荧光谷胱甘肽 GSH/GSSG 比率检测试剂盒进行检测的。蓝线:仅存在 GSH。红线:存在 1:1 GSH/GSSG。

 

表1:谷胱甘肽检测的相关产品

品牌 名称 货号 规格 Ex/Em(nm)
AAT Bioquest Amplite 荧光法谷胱甘肽检测试剂盒 绿色荧光 #10055 200 Tests 510/524
AAT Bioquest Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率检测试剂盒 绿色荧光 #10056 200 Tests 510/524
AAT Bioquest Amplite 荧光法谷胱甘肽GSH/GSSG比率快速检测试剂盒 绿色荧光 #10060 200 Tests 510/524

 

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸是丰富的可溶性辅助因子,在主要代谢途径中经历可逆氧化和还原。在细胞中,它们以未磷酸化(NAD 和 NADH)和磷酸化(NADP 和 NADPH)形式以氧化和还原状态存在。这些二核苷酸成对工作,每对都有不同的功能。它们已成为癌症研究的焦点,因为作为代谢物,它们可以将代谢途径与转录控制、表观遗传学和细胞信号传导联系起来,它也是研究细胞从正常代谢转变为癌细胞代谢的重要工具。

1.NAD/NADH

 NAD最常与分解代谢途径(糖酵解和氧化磷酸化)相关,但其在细胞中的作用不仅仅涉及能量代谢。NAD是多种信号通路的重要底物,参与基因表达的表观遗传调控。它是ADP核糖基化的底物,在DNA修复、信号调节和信号传导中发挥重要作用。NAD / NADH的比值影响许多酶的活性,特别是糖酵解酶的活性。

2.NADP/NADPH

NADP / NADPH是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸中含量最少的一对。NADPH与大分子的生物合成有关,为这些合成反应提供必要的还原力。生物合成增加的特点是迅速增殖的细胞,如癌细胞,因为NADPH被认为是癌症代谢产生的关键分子。它还对活性氧( Reactive oxygen species,ROS )的生成具有响应作用。

图 3. 使用Amlite 比色法 NAD/NADH 比率检测试剂盒(货号#15273)检测 96 孔白色透明底微孔板中的 NAD/NADH 比率。

表3:NAD/NADH相关产品

货号 产品名称 规格
15257 Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光 400 Tests
15258 Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法) 400 Tests
15261 Amplite NADH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光 400 Tests
15263 Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(荧光法) 红色荧光 250 Tests
15271 Amplite NADH检测试剂盒(比色法) 400 Tests
15273 Amplite NAD/NADH比率检测试剂盒(比色法) 250 Tests
15275 Amplite NAD+/NADH检测试剂盒(比色法)灵敏度增强型 400 Tests
15280 Amplite NAD检测试剂盒 (荧光法)蓝色荧光 200 Tests

 

表4:NADP/NADPH相关产品

货号 产品名称 规格
15260 Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒(比色法) 400 Tests
15262 Amplite NADPH检测试剂盒(荧光法) 红色荧光 400 Tests
15264 Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(荧光法) 红色荧光 250 Tests
15265 ReadiUse 即用型NADPH再生试剂盒 1000 Tests
15266 ReadiUse 即用型NADP再生试剂盒 200 Tests
15272 Amplite NADPH检测试剂盒(比色法) 400 Tests
15274 Amplite NADP/NADPH比率检测试剂盒(比色法) 250 Tests
15276 Amplite NADP+/NADPH检测试剂盒(比色法)灵敏度增强型 400 Tests
15281 Amplite NADP检测试剂盒(荧光法)蓝色荧光 200 Tests
15295 Cell Meter 细胞内NADH / NADPH荧光成像试剂盒 深红色荧光 100 Tests

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