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DNA 和 RNA 定量

准确的核酸定量是 DNA 和 RNA 样品制备中必不可少的步骤,并且经常有助于各种下游分子实验的成功(或失败)。通常用于量化 DNA 和 RNA 的方法包括吸光度 (UV-Vis) 检测、荧光检测和实时聚合酶链反应 (qPCR)。虽然每种方法都有其优点,但选择正确的技术可以节省大量时间和金钱,并且主要取决于实验需要和预期的下游应用。

为了高效核酸定量,百萤提供各种产品,包括手持式荧光仪、用于 DNA 或 RNA 浓度荧光检测的 Helixyte 和 Portelite 试剂盒,以及用于基于 qPCR 的定量的 DNA 结合染料和探针。

 

吸光度与荧光核酸定量

传统上,DNA 和 RNA 浓度是通过 UV-VIS 分光光度法测量光吸收来量化的。在 260 nm 处测量吸光度,DNA 和 RNA 在该处吸收光最强,总核酸浓度使用特定的转换因子确定。此外,在 230、280、320 或 340 nm 处进行的检测可用于检测非核酸染色,例如蛋白质、有机材料和其他干扰化合物。虽然吸光度法的优势在于其简单性、检测能力以及提供样品纯度信息,但它们无法区分 DNA 或 RNA,因为两者都吸收 260 nm 的光。

荧光的定量方法使用选择性结合双链 DNA、单链 DNA 或 RNA 的荧光染料,例如 Helixyte Green dsDNA、Helixyte Green ssDNA 或 StrandBrite Green RNA 染料,可实现更高灵敏度和特异性。由荧光计检测的荧光信号与样品中存在的核酸量成正比,并且由于荧光染料以高度特异性的方式结合。这两种方法之间的主要区别在于,通过荧光定量是一种间接方法,因此需要在定量前从已知浓度的标准样品中生成校准曲线。

表1. 吸光度和基于荧光的核酸定量方法的比较

定量方法 优点 缺点
紫外分光光度法
  • 快速且易于使用
  • 无害 - 不需要任何试剂
  • 提供有关样品纯度的信息
  • 灵敏度低且有限
  • 引起的误差较大
  • 无法区分 ssDNA、dsDNA 或 RNA
荧光法
  • 快速且易于使用
  • 高度灵敏和准确
  • 低浓度样品分析
  • 残留物对结果的影响很小
  • 优先检测核酸种类
  • 需要用标准样品校准

 

定量溶液中的核酸

百萤提供广泛的高灵敏度核酸染料和荧光的检测试剂盒,以量化溶液中的核酸。 Helixyte Green dsDNA 试剂、Helixyte Green ssDNA 试剂和 StrandBrite Green RNA 试剂 - 分别针对双链 DNA、单链 DNA(例如寡核苷酸)和 RNA 进行了优化 - 选择性结合并对其具有高亲和力感兴趣的核酸靶标。这些染料在结合核酸时荧光强度很高,能够快速检测复杂溶液中的低浓度核酸,而不受其他生物分子的干扰。 Portelite 定量试剂盒是在使用 CytoCite BG100 和 Qubit 荧光计对 ssDNA、DNA、RNA 或总核酸浓度进行高灵敏度和选择性定量。每个 Portelite 检测均采用靶标选择性核酸染料、即用型缓冲液、DNA 标准品和优化方案专门配制,允许使用简单的混合读取格式进行准确和直接的定量。

 

Helixyte Green DNA 定量试剂盒以及独立试剂

Helixyte Green 系列检测试剂盒和独立试剂用于使用标准荧光酶标仪简单、准确和灵敏地检测溶液中的 ssDNA、dsDNA 或总核酸浓度。每个 Helixyte 检测试剂盒均采用目标选择性 DNA 染料、即用型缓冲液、预稀释的 DNA 标准品和优化方案专门配制,可在各种浓度范围内进行准确定量,同时将常见污染物的干扰降至最低。与吸光度测量不同,这些测定在较宽的线性检测范围内灵敏度高几个数量级,非常适合使用 96 孔或 384 孔板进行高通量定量。 Helixyte Green 荧光 dsDNA 定量试剂盒可用于检测复杂溶液中低至 25 pg/mL 的 dsDNA,使其成为定量基因组 DNA、病毒 DNA、小量 DNA、PCR 扩增产物和其他需要少量 DNA 的应用。

Helixyte Green High Sensitivity
图1. 使用 Helixyte Green 荧光 dsDNA 定量试剂盒*高灵敏度*(蓝色)与 Quant-iT PicoGreen® dsDNA 检测试剂盒(红色)的 dsDNA 剂量反应比较结果图。
 
 
 

表2. 用于荧光酶标仪的 Helixyte Green 荧光 DNA 定量试剂盒

产品名称 Ex/Em (nm) 作用目标 检测范围 规格 货号
Helixyte 绿色双链DNA定量检测试剂盒 490/530 dsDNA 2-1000 ng 200 tests 17645
Helixyte Green双链DNA定量检测试剂盒 490/530 dsDNA 2-1000 ng 1000 tests 17646
Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒 适合酶标仪检测检测 490/525 dsDNA 0.2-100 ng 200 tests 17650
Helixyte Green 双链DNA荧光定量试剂盒 490/525 dsDNA 0.2-100 ng 200 tests 17651
Amplite 荧光 ssDNA 定量试剂盒 *针对微孔板酶标仪进行了优化* 490/525 ssDNA 1-200 ng 200 tests 17623
Amplite 荧光总核酸定量试剂盒 *针对酶标仪进行了优化* 490/525 dsDNA, ssDNA, RNA, oligos as little as 0.3 ng 200 tests 17630

表3. Helixyte Green DNA 定量试剂的选择指南

产品名称 Ex/Em (nm) 作用目标 检测范围 规格 货号
Helixyte Green 双链DNA定量试剂 490/525 dsDNA 0.2-100 ng 1 mL 17597
Helixyte Green 双链DNA定量试剂 490/525 dsDNA 0.2-100 ng 10 mL 17598
Helixyte Green ssDNA 试剂 490/525 ssDNA 1-200 ng 1000 tests 17620
Helixyte Green ssDNA 试剂 490/525 ssDNA 1-200 ng 10000 tests 17621

 

用于 CytoCite BG100 和 Qubit® 荧光计的 Portelite 核酸定量试剂盒

Portelite 荧光定量试剂盒针对 CytoCite BG100 荧光计进行了优化,旨在选择性定量总核酸、DNA(ssDNA、dsDNA)和 RNA,提供比基于紫外吸光度的同类仪器更灵敏的分析。上述试剂盒适用于多种常见的生物学应用,包括克隆、测序、转染、qPCR 和凝胶电泳。所有检测均使用相同的通用方案进行,提供了一种简单的混合读取检测格式,可最大限度地减少手动操作时间。每个 Portelite 试剂盒都包含浓缩的检测试剂、稀释缓冲液和预稀释的标准品。每个试剂盒中的荧光探针具有相似的光谱特性,可激发蓝光 (480 nm),发射波长介于 510 nm 和 580 nm 之间。 Portelite 荧光测定试剂盒专为与 CytoCite BG100 荧光计一起使用而开发,但也可用于其他市售的微型荧光测定仪,例如 Qubit® 荧光计。除了上述 Poretelite 定量试剂盒外,我们还提供用于定量内毒素和蛋白质的 Portelite 试剂盒。

Poretelite 荧光定量试剂盒的优势:

  1. 增强的选择性——检测利用选择性结合 ssDNA、dsDNA、总核酸或 RNA 的目标特异性染料
  2. 高灵敏度 - 仅需 1 µL 样品即可进行定量
  3. 宽动态范围 - 基于荧光的检测具有 4 到 5 个数量级的线性动态范围(10 pg/µL 至 1 µg/µL DNA)
Portelite DNA High Sensitivity
图 2. 使用 Portelite 荧光 DNA 高灵敏度定量试剂盒(货号 17661)生成的 DNA 标准曲线。

表4. Portelite 荧光核酸定量试剂盒,用于 CytoCite 和 Qubit® 荧光计

产品名称 仪器 Ex/Em (nm) 作用目标 检测范围 规格 货号
DNA定量试剂盒(荧光高灵敏度)针对CytoCite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化 CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/520 dsDNA 0.2-100 ng 100 tests 17660
DNA定量试剂盒(荧光高灵敏度)针对CytoCite 和Qubit 荧光分析仪进行了优化 CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/520 dsDNA 0.2-100 ng 500 tests 17661
Portelite 荧光法DNA 定量试剂盒*检测限更广* *适用于 Cytocite 和 Qubit 荧光仪* CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/530 dsDNA 2-1000 ng 100 tests 17665
Portelite 荧光 ssDNA 定量试剂盒 *针对 Cytocite 和 Qubit 荧光计进行了优化* CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/530 ssDNA 1-200 ng 200 tests 17625
Portelite 荧光总核酸定量试剂盒 *针对 Cytocite 和 Qubit 荧光计进行了优化* CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/530 dsDNA, ssDNA, RNA, oligos as little as 0.3 ng 200 tests 17631
Portelite 荧光法RNA定量试剂盒*优化于 Cytocite™ 和 Qubit™ 荧光仪* CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/530 RNA 5-100 ng 100 tests 17658
Portelite 荧光法RNA定量试剂盒*优化于 Cytocite 和 Qubit 荧光仪* CytoCite BG100 or Qubit® 荧光仪 480/530 RNA 5-100 ng 500 tests 17659

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