细胞凋亡篇：细胞中的增殖凋亡探索

 

 二、细胞增殖

1.CytoTell染料

CFSE 是的细胞增殖指示剂，广泛用于活细胞分析。然而，使用 CFSE 检测细胞增殖的过程中存在一些严重的问题。 1. CFSE 对细胞有剧毒，因为 CFSE 会不加选择地与所有氨基发生反应，从而影响许多关键的细胞内蛋白质功能（如细胞膜 GPCR）； 2.CFSE响应慢，使用不方便。第二代细胞的CFSE荧光强度比第一代降低了10倍以上。 3.需要去除介质。由于 CFSE 会与培养基成分发生反应，因此您必须使用流式细胞仪去除培养基进行细胞分析。

我们研发的CytoTell染料，可以上述 CFSE 的缺点。 CytoTell Green 也可用于长期跟踪标记细胞。用 CytoTell Green 标记的细胞可以固定和透化，以使用标准的含甲醛固定剂和透化缓冲液分析细胞内靶标。 CytoTell Green 可以被 488 nm 激发光线激发，峰值发射在 520 nm，这使其与 FITC 滤光片组兼容。

图 3.CytoTell染料工作原理。 CytoTell染料由三个成分组成：a荧光阻断剂； b掩蔽荧光团；c细胞保留部分。进入活细胞后，CytoTell 染料的荧光通过去除荧光阻断剂释放，释放的荧光团通过细胞保留基团保留在细胞中

 

表2：CytoTell染料

产品名称	货号	规格	Ex/Em(nm)
CytoTell 绿色	22240	500 Tests	492/514
CytoTell 蓝色	22251	500 Tests	410/445
CytoTell 红色650	22255	500 Tests	626/643
CytoTell 橙色	22257	500 Tests	541/560
CytoTell紫色 500	22248	500 Tests	415/499

 

2.Brdu细胞增殖检测试剂

在细胞周期的 S 期（DNA 合成），BrdU 被整合到新合成的 DNA 中，并且可以很容易地被抗 BrdU 特异性抗体检测到。除了 DNA 增加外，某些蛋白质的水平也会由于细胞增殖而增加。例如，Ki67 是一种在分裂细胞核中表达的抗原。然而，在细胞周期的 G0 阶段，它没有被检测到。 Ki67 可与其他增殖标记物（如 BrdU 和 CytoTell 染料）结合使用。

图 4.细胞增殖表现出 DNA 合成和细胞倍增之间的密切关联。

 

表3：Brdu细胞增殖检测试剂

产品名称	货号	规格	分子量
BrdU 细胞增殖检测试剂	17030	25 mg	307.09
BrdUTP	17031	100 ul	612.98
BrUTP	17032	100 ul	628.98

 

3.刃天青细胞增殖检测试剂

刃天青是一种、水溶性和氧化还原敏感性染料，在通过许多生物过程还原为试卤灵后，它会从蓝色/无荧光状态变为粉红色/高荧光状态。添加到活细胞中的刃天青通过细胞中的酶促或化学反应通过尚不为人知的机制减少。此功能广泛用于测量细胞增殖、活力和细胞毒性。可在培养期间的任何时间加入刃天青。对于细胞增殖的测量，好在对数生长期期间添加刃天青。孵育时间可能因被测细胞系的代谢率而异。可以使用 544 nm/590 nm 滤光片组读取荧光。可以使用设置为 570 nm 的分光光度计读取吸光度。

 

4.CCK-8细胞凋亡检测试剂盒

cck-8是一种基于 WST-8 的广泛应用于细胞增殖和细胞毒性的快速高灵敏度检测试剂盒。其主要成分为水溶性四唑盐 WST-8 (2-(2-甲氧基-4-硝苯基)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐)，WST-8 是一种类似于 MTT 的化合物，在电子耦合试剂存在的情况下，可以被线粒体内的一些脱氢酶还原生成橙黄色的水溶性的甲臜（formazan)。WST-8 被细胞内脱氢酶生物还原后生成的甲臜能够直接溶解在培养基中。细胞增殖越多越快，则颜色越深；细胞毒性越大，则颜色越浅;颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞毒性成反比。使用酶标仪在450mM波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。对于同样的细胞，颜色的深浅和细胞数目呈线性关系。

图 5.CCK-8 检测细胞活性原理图

 

表4：cck-8及其相关产品

产品名称	货号	规格
Cell Counting Kit-8 (CCK-8)	TJ35000-TJ35004	1ml/5ml/10ml/30ml/100ml
WST-8检测试剂	15705-15707	25mg/100mg/1g
比色法WST-8检测试剂盒	22770/22771	1000Tests/5000Tests
比色法MTT检测试剂盒	22768/22769	1000Tests/5000Tests

 

5.Bucculite系列细胞增殖检测试剂盒

检测细胞增殖的一种基本方法是在细胞生长的S期过程中，在存在胸腺嘧啶核苷的情况下检测DNA合成。我们的Bucculite系列产品使用FdU、XdU等，该产品是BrdU和EdU的替代品。

图 6.分别使用FdU和XdU检测S期HeLa细胞图像。

 

表5：Bucculite系列产品

产品名称	货号	规格
Bucculite FdU 细胞增殖荧光成像试剂盒	22305 / 22315 / 22320	200 Tests
Bucculite XdU细胞增殖荧光成像试剂盒	22321 / 22323 / 22325 / 22326 / 22327 / 22328	100 Tests/200 Tests

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三、细胞凋亡

表6：不同凋亡探针的特点

凋亡引起的细胞变化	可使用的探针	特点及仪器应用
细胞膜改变（PS外露）	Annexin V检测试剂/试剂盒	检测早期凋亡标志物，流式细胞术或免疫荧光应用
Caspase（细胞质）	Caspase 活性检测试剂/试剂盒	快速、简单和高通量
Caspase 结合（细胞质）	荧光半胱天冬酶抑制剂/试剂盒	ELISA、流式细胞术、Western Blot
DNA 片段化（核）	BrdU检测、TUNEL检测	贴壁细胞、流式细胞术周期分析
线粒体变化	线粒体染色	使用流式细胞术、荧光显微镜或荧光酶标仪进行快速、简单的单细胞分离

 

1.Caspase家族

细胞凋亡早期阶段的一个显著特征是半胱天冬酶的。 半胱氨酸——天冬氨酸特异性蛋白酶 caspase (CED-3/ICE) 家族的成员，已被确定为与细胞凋亡相关的复杂生化事件的关键介质。 caspase 的识别位点由三到四个氨基酸标记。 半胱天冬酶蛋白酶通常作为无活性前体合成。

图 7.半胱天冬酶敏感的肽片段掩蔽氨基染料然后被半胱天冬酶消化以产生高度荧光染料。 荧光强度增加与半胱天冬酶活性成正比。

 

表7：人半胱天冬酶功能分类

细胞死亡途径	Caspase类型	caspase酶	所属生物
细胞凋亡	起始因子	Caspase 2	人或鼠
细胞凋亡	起始因子	Caspase 8	人或鼠
细胞凋亡	起始因子	Caspase 9	人或鼠
细胞凋亡	起始因子	Caspase 10	人
细胞凋亡	效应因子	Caspase 3	人或鼠
细胞凋亡	效应因子	Caspase 6	人或鼠
细胞凋亡	效应因子	Caspase 6	人或鼠
细胞焦亡	炎症	Caspase 1	人或鼠
细胞焦亡	炎症	Caspase 4	人
细胞焦亡	炎症	Caspase 5	人
细胞焦亡	炎症	Caspase 11	鼠
细胞焦亡	炎症	Caspase 12	部分人或鼠
细胞焦亡	炎症	Caspase 13	牛

 

表8：半胱天冬酶活性的肽识别序列 对于半胱天冬酶底物和抑制剂

肽识别序列	氨基酸序列	目标Caspase
IETD	Ile-Glu-Thr-Asp	Caspase 8, Granzyme B
DEVD	Asp-Glu-Val-Asp	Caspase 3, 6, 7, 8, or 10
LEHD	Leu-Glu-His-Asp	Caspase 9
VAD	Val-Ala-Asp	Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9 or 10

 

表9：显色半胱天冬酶底物

底物	目标Caspase	吸收 (nm)	颜色	规格	货号
Ac-DEVD-pNA *CAS 189950-66-1*	Caspase 3	405 nm	黄色	5 mg	13405
Z-DEVD-pNA	Caspase 3	405 nm	黄色	5 mg	13422
Z-IETD-pNA *CAS 219138-21-3*	Caspase 8, Granzyme B	405 nm	黄色	5 mg	13413

 

表10：荧光半胱天冬酶底物

底物	目标Caspase	Ex (nm)	Em (nm)	ε¹	Φ²	规格	货号
Ac-DEVD-AFC *CAS 201608-14-2*	Caspase 3, 7	376	482	17000	0.53	5 mg	13401
Ac-DEVD-AMC *CAS 169332-61-0*	Caspase 3, 7	341	441	19000	N/D	5 mg	13402
Z-DEVD-AFC	Caspase 3, 7	376	482	17000	0.53	5 mg	13420
Z-DEVD-AMC *CAS 1135416-11-3*	Caspase 3, 7	341	441	19000	N/D	5 mg	13421
Z-DEVD-ProRed™ 620	Caspase 3, 7	532	619	N/D	N/D	1 mg	13433
(Z-DEVD)2-R110 *CAS 223538-61-2*	Caspase 3, 7	500	522	80000	N/D	1 mg	13430
Z-DEVD-ProRed™ 620	Caspase 3, 7	532	619	N/D	N/D	1 mg	13433
Ac-IETD-AFC *CAS 211990-57-7*	Caspase 8, Granzyme B	376	482	17000	0.53	5 mg	13410
Ac-IETD-AMC	Caspase 8, Granzyme B	341	441	19000	N/D	5 mg	13411
Z-IETD-AFC *CAS 219138-02-0*	Caspase 8, Granzyme B	376	482	17000	0.53	5 mg	13425
(Ac-IETD)2-R110	Caspase 8, Granzyme B	500	522	80000	N/D	1 mg	13431
Z-IETD-ProRed™ 620	Caspase 8, Granzyme B	532	619	N/D	N/D	1 mg	13434
Ac-LEHD-AMC *CAS 292633-16-0*	Caspase 9	341	441	19000	N/D	5 mg	13426
(Ac-LEHD)2-R110	Caspase 9	500	522	80000	N/D	1 mg	13427
Z-LEHD_ProRed™ 620	Caspase 9	532	619	N/D	N/D	1 mg	13435

 

表11：可逆和不可逆半胱天冬酶抑制剂

抑制剂	目标Caspase	结合	Ex (nm)	Em (nm)	规格	货号
Ac-DEVD-CHO *CAS 169332-60-9*	Caspase 3, 7	可逆的	-	-	1 mg	13403
Ac-IETD-CHO *CAS 191338-86-0*	Caspase 8	可逆的	-	-	5 mg	13412
mFluor 450-VAD-FMK	Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10	不可逆	406	445	25 tests	13475
mFluor™ 510-VAD-FMK	Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10	不可逆	412	505	25 tests	13476
FITC-C6-DEVD-FMK	Caspase 3, 7	不可逆	491	516	1 mg	13406
FITC-C6-DEVD-FMK	Caspase 3, 7	不可逆	491	516	100 µg	13408
FITC-C6-LEHD-FMK	Caspase 9	不可逆	491	516	1 mg	13407
FITC-C6-LEHD-FMK	Caspase 9	不可逆	491	516	100 µg	13409
FAM-VAD-FMK	Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10	不可逆	493	517	25 tests	13470
SRB-VAD-FMK [Sulforhodamine B-VAD-FMK]	Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10	不可逆	559	577	25 tests	13472
TF4-VAD-FMK	Caspase 1, 2, 3, 6, 8, 9, 10	不可逆	578	602	25 tests	13471

 

1.1 Caspase 3、7、8 和 9 活性检测

Cell Meter Caspase 活性检测试剂盒为检测细胞中的 Caspase 活性提供了一种强大而方便的方法。这些试剂使用含有识别位点的底物，这些识别位点专用于检测 caspase 3 和 7、caspase 8 或 caspase 9 的，以及设计用于同时检测所有四种 caspase 的多重检测。半胱天冬酶识别序列的结合抑制了荧光团或发光团产生可量化信号的能力。在适当的半胱天冬酶存在的情况下，荧光团或发光团从识别序列上切割下来并自由产生表示细胞凋亡的荧光或发光信号。 

图 8.Jurkat 细胞中 Caspase 活性的检测。 Jurkat 细胞在同以 200,000 个细胞/孔接种在 Costar 黑色/透明 96 孔板中。 细胞用终浓度为 1 mM 的星形孢菌素处理 4 小时（红色条），而未处理的细胞用作对照（蓝色条）。 添加单 caspase 检测溶液（100 µL/孔）（caspase 3/7 #1、caspase 8 #2 或 caspase 9 #3）或三重 caspase 检测溶液（caspase #4 加入 3/7、8 和 9）并在室温下孵育 1 小时。 使用 FlexStation 荧光酶标仪在指定波长检测荧光强度。 caspase 3/7、8 和 9 的活性可以在单次测定中检测到，而不受其他 caspase 的干扰。

 

表12：用于检测 Caspase 3、7、8 和 9 活性的试剂盒

试剂盒	平台	Ex (nm)	Em (nm)	规格	货号
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光	微孔板/HCS	360	570	200 tests	22795
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光	微孔板/HCS	490	525	200 tests	22796
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光	微孔板/HCS	540	620	200 tests	22797
Cell Meter Caspase 3/7活性细胞凋亡检测试剂盒 绿色荧光 适合于流式细胞检测	流式细胞仪	488	530	100 tests	22823
Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光	微孔板/HCS	370	450	200 tests	22812
Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光	微孔板/HCS	490	525	200 tests	22798
Cell Meter Caspase 8活性细胞凋亡检测试剂盒 红色荧光	微孔板/HCS	540	620	100 tests	22816
Cell Meter Caspase 9活性细胞凋亡检测试剂盒 蓝色荧光	微孔板/HCS	375	435	200 tests	22813
Cell Meter Caspase 3/7/8/9活性细胞凋亡复用检测试剂盒 三色荧光	微孔板/HCS	三重荧光	三重荧光	100 tests	22820

 

表13：caspase 3/7 活性溶液的检测

产品名称	样品类型	平台	Ex (nm)	Em (nm)	规格	货号
Amplite 比色法Caspase 3/7活性检测试剂盒 黄色荧光	Cell Extracts	光吸收酶标仪	490	/	200 tests	13507
Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 蓝色荧光	Cell Extracts	荧光酶标仪	350	450	500 tests	13502
Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 绿色荧光	Cell Extracts	荧光酶标仪	490	525	500 tests	13503
Amplite 荧光法Caspase 3/7活性检测试剂盒 红色荧光	Cell Extracts	荧光酶标仪	535	620	100 tests	13504

 

1.2 活细胞 Caspase 结合分析

在细胞凋亡中，关键事件之一是半胱天冬酶的，这对于细胞凋亡的启动很重要。 Cell Meter 活细胞 Caspase 结合试剂盒使用荧光细胞渗透性和探针来检测 Caspase 1、2、3/7、6、8、9、10 和 13 的活性。一旦与半胱天冬酶结合，荧光试剂就会保留在细胞内。结合后会阻止半胱天冬酶进一步催化，但不会阻止细胞凋亡的进行。 Caspase 结合试剂盒适用于荧光显微镜、流式细胞仪和荧光酶标仪。

 

表14：caspase 结合检测试剂盒

产品名称	目标Caspase	Ex (nm)	Em (nm)	滤波片	通道	规格	货号
Cell Meter 活细胞Caspase 1结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 1	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20108
Cell Meter 活细胞Caspase 2结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 2	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20111
Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 3/7	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20100
Cell Meter 活细胞Caspase 3/7结合检测试剂盒 红色荧光	Caspase 3/7	550	595	TRITC	FL1	25 Tests	20101
Cell Meter 活细胞Caspase 6结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 6	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20113
Cell Meter 活细胞Caspase 8结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 8	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20115
Cell Meter 活细胞Caspase 9结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 9	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20117
Cell Meter 活细胞Caspase 10结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 10	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20119
Cell Meter 活细胞Caspase 13结合检测试剂盒 绿色荧光	Caspase 13	490	525	FITC	FL1	25 Tests	20125
Cell Meter 通用Caspase活性荧光法检测试剂盒 红色荧光 适合于流式细胞检测	Caspase-1, 3/7, 4, 5, 6, 8, 9	649	664	-	APC	25 Tests	22822

 

2. Annexin V

细胞膜的改变是活细胞早期凋亡的标志。在细胞凋亡的初始阶段，磷脂酰丝氨酸 (PS) 残基从细胞膜的内叶转移到外叶。在细胞成像和流式细胞术中，荧光标记的膜联蛋白 V 缀合物通常用于与外化 PS 残基结合来检测凋亡细胞。

 

表15：膜联蛋白 V 缀合物简介

应用	检测外化磷脂酰丝氨酸以识别凋亡细胞
适用仪器	荧光显微镜、其他活细胞成像仪器和流式细胞仪
活细胞	适用
可固定	可以，用甲醛染色后固定
多路复用	可用于多重分析

 

2.1 用于检测细胞凋亡的膜联蛋白 V 缀合物

与 iFluor 染料结合的膜联蛋白 V 提供了一种快速可靠的方法来检测外化 PS。 Annexin V iFluor 探针的亮度和光稳定性明显优于大多数 Alexa Fluor® 和其他光谱相似的 Annexin v 缀合物。

 

表16：可用于细胞凋亡检测的膜联蛋白 V 缀合物

Annexin V 标签	Ex (nm)	Em (nm)	滤波片	ε	Φ	规格	货号
iFluor 350	345	450	DAPI	20000	0.95	100 tests (200 µL)	20070
iFluor 488	491	516	FITC	75000	0.9	100 tests (200 µL)	20071
iFluor 555	557	570	TRITC	100000	0.64	100 tests (200 µL)	20072
iFluor 594	588	604	Texas Red	180000	0.53	100 tests (200 µL)	20073
iFluor 633	640	654	Texas Red	250000	0.29	100 tests (200 µL)	20069
iFluor 647	656	670	Cy5	250000	0.25	100 tests (200 µL)	20074
iFluor 680	684	701	Cy5.5	220000	0.23	100 tests (200 µL)	20075
iFluor 700	690	713	Cy5.5	220000	0.23	100 tests (200 µL)	20077
iFluor 750	757	779	Cy7	275000	0.12	100 tests (200 µL)	20076
AF350 (Alexa Fluor® 350 equivalent)	343	441	DAPI	19000	N/D³	100 tests (200 µL)	20090
AF488 (Alexa Fluor® 488 equivalent)	499	520	FITC	73000	0.92	100 tests (200 µL)	20092
AF594 (Alexa Fluor® 594 equivalent)	590	618	Texas Red	92000	0.66	100 tests (200 µL)	20096
FITC	491	516	FITC	73000	0.79	100 tests (200 µL)	20030
TRITC	544	570	TRITC	100000	0.1	100 tests (200 µL)	20031
Cy3	555	569	Cy3/TRITC	150000	0.04	100 tests (200 µL)	20065
Cy5	656	670	Cy5	250000	0.25	100 tests (200 µL)	20066
Cy5.5	684	701	Cy5.5	220000	0.23	100 tests (200 µL)	20067
Cy7	756	779	Cy7	250000	0.3	100 tests (200 µL)	20068

 

2.2 用于流式细胞术的膜联蛋白 V 缀合物

与 mFluor 染料、PacBlue、APC 和 PE 结合的膜联蛋白 V 是通过流式细胞术检测细胞凋亡的探针。这些缀合物可以与其他染料（如核酸染料）结合使用，以准确评估凋亡、坏死和死细胞的混合群体。

图 9. 在 Jurkat 细胞中检测 Annexin V-mFluor Violet 450 缀合物与磷脂酰丝氨酸的结合活性。

 

表16：可用于细胞凋亡检测的膜联蛋白 V 缀合物

Annexin V 标签	激光	Ex (nm)	Em (nm)	通道	ε	Φ	规格	货号
PacBlue	Violet Laser	410	455	DAPI/FL-1 Channel	46000	0.78	100 tests (200 µL)	20089
mFluor Violet 450	Violet Laser	403	454	DAPI/FL-1 Channel	25000	0.92	100 tests (200 µL)	20080
mFluor Violet 510	Violet Laser	414	510	FITC/FL-1 Channel	30000	0.86	100 tests (200 µL)	20081
mFluor Violet 540	Violet Laser	424	560	PE/FL-2 Channel	15000	0.64	100 tests (200 µL)	20082
mFluor Blue 570	Blue Laser	533	570	PE/FL-2 Channel	120000	0.08	100 tests (200 µL)	20085

 

2.3 Cell Meter Annexin V系列凋亡检测

Cell Meter Annexin V 凋亡检测试剂盒提供了一种快速方便的方法，通过检测磷脂酰丝氨酸的外化来检测凋亡细胞。每个试剂盒都包含与 iFluor 染料、mFluor 染料、APC、PE 或 FITC 结合的重组膜联蛋白 V，用于检测早期凋亡细胞中易位的 PS。PI 和Nuclear Red DCS1 都不能渗透活细胞，但会用强烈的红色荧光染色坏死和死细胞。用膜联蛋白 V 缀合物和核酸染料染色细胞后，凋亡细胞会显示出膜联蛋白 V 缀合物荧光，死细胞显示出红色和膜联蛋白 V 缀合物荧光，活细胞显示出很少荧光或没有荧光。使用流式细胞仪可以很容易地区分细胞群。

 

表17：Cell Meter Annexin V 结合凋亡检测选择指南

Annexin V缀合物	死细胞染色	Annexin V 缀合物 Ex/Em	死细胞染色 Ex/Em	规格	货号
Annexin V-iFluor 488	PI	490/ 520 nm	534/617 nm	100 Tests	22824
Annexin V-iFluor 555	无	554/578 nm	/	100 Tests	22825
Annexin V-iFluor 594	无	590/610 nm	/	100 Tests	22826
Annexin V-iFluor 647	无	650/668 nm	/	100 Tests	22827
Annexin V-mFluor Violet 450	PI	405/450 nm	534/617 nm	100 Tests	22828
Annexin V-mFluor™ Violet 500	PI	414/508 nm	534/617 nm	100 Tests	22829
Annexin V-mFluor Violet 550	PI	424/560 nm	534/617 nm	100 Tests	22830
Annexin V-APC	PI	651/662 nm	534/617 nm	100 Tests	22837
Annexin V-PE	Nuclear Red DCS1	565/575 nm	631/651 nm	100 Tests	22838
Annexin V-FITC	PI	490/520 nm	534/617 nm	100 Tests	22839

 

3. TUNEL检测

在细胞凋亡的后期阶段，半胱天冬酶的核酸内切酶将基因组 DNA 切割成寡核小体片段（约 180-200 个碱基对长）。使用 TUNEL 检测，这些断裂的暴露 3'-OH 末端可以用修饰的 dUTP 进行标记，以便随后对原位凋亡细胞进行可视化和量化。这通常是直接使用染料修饰的 dUTP 或间接使用BrdUTP和针对 BrdUTP 的抗体缀合物来完成的。使用怎样的标记方式，都需要酶末端脱氧核苷酸转移酶 (TdT) 来催化修饰的 dUTP 掺入 3'-OH 末端。

图 10. TUNEL工作原理

 

3.1 活细胞TUNEL检测

传统上，TUNEL检测需要样品的固定和透化，以促进外源性 TdT 的进入并确保成功标记 DNA 。我们的Cell Meter 活细胞 TUNEL 细胞凋亡检测是鉴定 DNA 片段化，无需酶 TdT 及其使用时的额外处理。这些检测利用专有的透膜荧光染料被动进入活细胞并选择性靶向细胞凋亡过程中形成的 DNA 切口。然后可以通过荧光显微镜、流式细胞术或基于荧光的微孔板检测直接观察荧光标记的 DNA 片段。 

图 11. 与未处理的对照相比，用 100 nM 或 1 µM 星形孢菌素 (SS) 处理 4 小时后 HeLa 细胞中 TUNEL 反应的荧光图像。

 

表18：用于活细胞的TUNEL 检测试剂盒

试剂盒	Ex/Em (nm)	Cutoff (nm)	滤波片	通道	规格	货号
Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 绿色荧光	490/525	515	FITC Filter Set	FITC Channel	25 tests	22849
Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光	550/590-650	570	TRITC Filter Set	PE-Cy5 Channel	25 tests	22844

 

3.2 用于固定细胞和组织样品的 TUNEL 检测

Cell Meter 固定细胞和组织 TUNEL 检测遵循传统的 TUNEL 方法，并针对固定细胞和组织切片中的原位凋亡检测进行了优化。这些检测通过使用 TdT 催化染料修饰的 dUTP 并掺入片段化 DNA 的 3'-OH 末端中，直接识别群体内的凋亡细胞。然后可以分别使用荧光显微镜或流式细胞术对荧光标记的 DNA 片段进行可视化或定量。 

图 12. 使用 Cell Meter 固定细胞和组织 TUNEL 细胞凋亡检测试剂盒*绿色荧光*对福尔马林固定石蜡包埋 (FFPE) 人肺腺癌切片进行 TUNEL 检测。

 

表19：用于固定细胞和组织的 Cell Meter TUNEL 检测试剂盒

试剂盒	dUTP	Ex/Em (nm)	通道	滤波片	规格	货号
Cell Meter 固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*蓝色荧光*	DEAC-dUTP	405/525	Pacific Orange Channel	Violet Filter Set	25 tests	22857
Cell Meter 固定化细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*绿色荧光*	Fluorescein-12-dUTP	488/530	FITC Channel	FITC Filter Set	25 tests	22851
Cell Meter 固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡检测试剂盒*红色荧光*	TMR-dUTP	488/575	PE Channel	Cy3/TRITC Filter Set	25 tests	22853
Cell Meter 固定细胞和组织TUNEL细胞凋亡测定试剂盒*深红色荧光*	TF5-dUTP	633 or 640/660	APC Channel	Cy5 Filter Set	25 tests	22855

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